水中大肠杆菌群书的监测（发酵法）
一、试验目的：
1.了解和学习水中大肠杆菌的测定原理和测定意义。

2.学习和掌握水中大肠杆菌的监测方法。

二、试验原理：
水的微生物学的检验，特别是大肠杆菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。

国家饮用水的标准规定饮用水中大肠杆菌群书每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。

水中大肠杆菌的检验方法，常用多管发酵发和滤膜法。

多管发酵发可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。

滤膜法仅用于自来水和深井水。

操作简洁快速，但不适用于杂质较多，易于阻塞滤孔的水样。

三、试验材料：
1.培养基：乳糖蛋白胨培养基，伊红美蓝培养基
2.器材：灭菌三角瓶、无菌平皿、无菌吸管、无菌试管等。

四、试验内容
第一天：
1.水样的采集
自来水洗将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，在开放水龙头取水流5ｍｈ，以灭菌山角瓶接水取样以备分析。

2.用发酵法检查大肠杆菌
（1）生活饮用水的检验
①初步发酵试验：在2个各装有50ｍｈ的3倍乳糖蛋白胨培养液的三角瓶中，以无菌操作各自加水样10ｍｈ。

摇匀后，37℃培养24ｈ
第二天：
②平板分离：经24ｈ培养后。

特产酸产气及只产酸的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板（EMD培养基上），37℃培养18～24ｈ。

大肠杆菌群在EMD平板上，菌落呈紫黑色，具有或略带或不带有金属光泽，或者呈淡紫红色，仅中心颜色较深，挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。

第三天：
③复发酵试验：将革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的剩余部分接于单倍乳糖发酵管中，为防止遗漏，每管可接种来自同一初发酵管的平板上同一类型菌群1～3个，37℃培养24ｈ，如果产酸又产气者，即证实有大肠菌群存在。

第四天：
④报告：根据证实有大肠菌群存在的复发酵管的阳性管，查附录1或2，报告每升水样品中大肠菌群数（MPN）
五、思考题
记录试验结果，并对所测样品作出评价。