动物细胞培养的特点
动物细胞培养的特点
1. 细胞生长缓慢，易受微生物污染，培养时需要抗生素； 2. 动物细胞较微生物大得多，无细胞壁，机械强度低，适应 环境能力差； 3. 培养过程需氧量少，且不耐受强力通风与搅拌； 4. 在机体中，细胞相互粘连以集群形式存在； 5. 培养过程产物分布于细胞内外，成本高，产品价格昂贵； 6. 大规模培养时，不可套用微生物反应的经验； 7. 原代培养细胞一般繁殖50代即退化死亡。
• 半连续式操作
• 连续操作
能提高细胞密度，应用于培 养悬浮型细胞。
• 灌注培养
大大提高细胞密度，有助于 产物的表达和纯化。
动物细胞培养反应器
动物细胞培养反应器
通气搅拌式细胞培养反应器
通气搅拌式细胞培养反应器
动物细胞培养反应器
• 气升式细胞培养反应器
气升式培养系统的优点： ① 没有移动部件； ② 完全密封； ③ 便于无菌操作； ④ 设计简单； ⑤ 便于放大生产； ⑥ 氧的转换率高。
动物细胞培养方法
固定化培养
一种包埋培养。对两类细胞都适用，细胞生长密度高， 抗剪切力和抗污染能力强。悬浮型细胞常用海藻酸钙包埋， 贴壁型细胞常用胶原包埋。
动物细胞培养技术的应用
动物细胞培养可生产的生物制品
1.病毒疫苗：口蹄疫(FMD)、狂犬疫苗等 2.非抗体免疫调节剂：干扰素(IFN)、白介素(IL)等 3.多肽生长因子：神经生长因子(NGF)、成纤维细胞生长因子(FGF) 4.酶：组织血纤维溶酶原激活剂(t-PA) 5.激素：红细胞生成素(EPO)、促黄体生成素(LH) 6.病毒杀虫剂 7.肿瘤特异性抗原：癌胚抗原(CEA) 8.单克隆抗体 9.皮肤重植 10.细胞
动物细胞培养方法
体外培养的动物细胞根据它们在培养器皿是否能贴附于支 持物上生长特征，可分为贴附型生长和悬浮型生长两大类。
贴附型细胞在培养时能贴附在支技物表面生长。大多数动物
细胞属于贴壁型细胞，如Hela、Vero、BHK、CHO细胞系。
悬浮型细胞在培养中悬浮生长。来源于血液、淋巴组织的
细胞，许多肿瘤细胞和某些转化细胞。
动物细胞培养方法
贴壁培养(单层细胞培养)
分散的细胞悬浮在培养瓶中很快(几十分钟至几小时)就贴 附在瓶壁上， 称为细胞贴壁， 贴壁后的细胞形态形成多态 性， 呈单层生长， 所以此法又叫单层细胞培养。
悬浮培养
细胞在培养器中自由悬浮生长的过程，不贴壁，主要用于 悬浮型细胞培养，如淋巴细和肿瘤细胞的培养。
动物细胞培养反应器
• 微载体细胞培养反应器 微载体系统培养动物细胞的优点： ⑴比表面积大，单位体积培养培养基细胞产率高; ⑵微载体悬浮于培养基中，细胞生长环境均一，简化了 这些环境因素的检测和控制; ⑶培养基的利用率高; ⑷采样重演性好; ⑸收获过程简单; ⑹放大较容易; ⑺劳动强度小，占用空间小。
动物细胞培养技术的应用
动物细胞培养生产生物制品工艺实例
1.组织纤溶酶激活剂生产工艺流程 细胞单层 分散 细胞悬液 培养 细胞培养物 分离 培养液
提取 提取液 层析纯化 层析液 浓缩 浓缩液 层析精制 层析液 冻干 tPA成品
2.抗HBsAS的单克隆抗体生产工艺流程 大鼠骨髓瘤＋免疫大鼠脾淋巴细胞 融合 融合混合物 筛选 杂种细胞混合物 克隆化 杂交瘤克隆系 种质培养 细胞种质 扩大培养 培养液 分离 粗制McAb 精制 层析液 超虑 浓缩液 冻干 McAb精品
动物细胞培养反应器
• 细胞培养流程
动物细胞培养反应器
• 中空纤维细胞培养反应器
动物细胞培养反应器
• 中空纤维细胞培养反应器
优点： ① 培养体积小，细胞高密度生长； ② 有浓缩产品的功能； ③ 产物纯度高； ④ 自动化程度高，细胞生长周期长。
缺点： 中空纤维价格昂贵，生产成本高。
动物细胞培养反应器
• 微囊细胞培养反应器
特点： ① 细胞密度大； ② 产物浓度高； ③ 分离纯化操作经济简单； ④ 抗体活性、纯度好
动物细胞培养反应器
• 微载体细胞培养反应器
悬浮培养瓶
悬浮培养装置
动物细胞培养反应器
• 微载体细胞培养反应器
动物细胞培养反应器
• 微载体细胞培养反应器
细胞培养的操作方式
无论是贴壁细胞还是悬浮细胞，深层培养的操作方式可分 分批式、流加式、半连续式、连续式和灌注式。 • 分批式操作
操作简单、是最常用的操作方式。分批式培养过程中，细胞 的生长可分为延迟期、对数生长期、减速期、平稳期和衰退期
分批式培养细胞生长曲线
细胞培养的操作方式
• 流加式操作
能够调节培养环境中营养物 质的浓度。