实验土壤硝态氮的紫外分光光度法
根层土壤中硝态氮的含量与植物生长发育有着密切的关系，其测定结果可
为合理施肥，肥料规划和估产提供依据。

一 .目的要求
了解紫外 / 可见分光光度计的基本结构，掌握用波长选择消除干扰组分的
测定技术，用校正因数法测定土壤硝态氮的含量。

二 .方法原理
用氯化钠溶液提取土壤硝态氮，于紫外分光光度计上分别测量其210 和 275 纳米的吸光度，前者是硝酸根和以有机质为主的杂质的吸收值，后者是以有机
质为主的杂质的吸收。

因为 275 纳米处硝酸根已无吸收，而有机质在 275 纳米处的吸收值是 210 纳
米处的 f 倍，故可将 A275 校正为有机质在 210 纳米处的干扰吸收，从 A210 中减去，即得硝酸根在 210 纳米处得真实吸收值，再利用标准曲线法求得土壤中硝态氮
得含量。

三 .器皿与试剂
1.紫外、可见分光光度计和xx 比色皿。

2.50 毫升容量瓶 10 个， 100 和 250 毫升锥形瓶各 4 个，漏斗 4 个，普通试
管 4 支， 50 毫升胖肚吸管 1 支，
5、10 毫升和 2 毫升刻度吸管各一只，滴管 2 支。

3.氯化钠溶液 1mol/L:
称取氯化钠 58.44 克溶于 400 毫升水中，转入 1 升容量瓶中，稀释至刻度。

4.硝态氮标准溶液100μ g/ml:
称取于 105℃烘制 2 小时得硝酸钾 0.3609 克溶于水，转移至 500 毫升容量瓶中，用水定容。

临用时再稀释至 20μg/ml。

5.硫酸溶液， 10％（ V/V）
四 .测定步骤
1.待测液制备
称取 10.00 克风干土样于 250 毫升锥形瓶中，加入50 毫升 1 mol/L 的氯化钠溶液，加塞振荡30 分钟，过滤于干净干燥的100 毫升锥形瓶中，初液弃去。

同时做试剂空白。

2.标准曲线绘制与测定
吸取 20μg/ml硝态氮标准溶液0.
00、0.
50、1.
00、2.
00、3.
00、4.00 毫升分别置入 50 毫升容量瓶中，用水定容至刻度后，再加入 2 毫升 10％硫酸溶液，摇匀。

浓度分别为 0.
00、
0.
20、0.
40、0.
80、1.20 和 1.60 μ g/ml。

以零浓度标液作参比，于 210 米处测定标准系列的吸光度，绘制标准曲线或建立回归方程。

去土壤浸体液和试剂空白液各 10 毫升入试管中，加入 0.8 毫升 10％硫酸，摇匀。

以试剂空白作参比，分别于 210 纳米和 275 纳米处测定吸光度，不要每
测一个样品改变一次波长，以避免逐次改变波长而引入波长重现性误差。

若土
壤浸体液吸光度太大，可用氯化钠溶液稀释，但应按比例加入硫酸溶液。

测定时，向比色皿中加入待测液不要超过容积。

3.结果计算
根据测得 A210 和 A275，按下式计算硝态氮的吸光度△A
△A=A210-f × A275
由△ A 从工作曲线上查得相应浓度，乘以液土比和稀释倍数，即为土壤
硝态氮含量。

式中 f 为校正因数，本实验取值为 3.6。

五 .问题讨论
1.为什么标准曲线溶液不加入试剂空白？标准定容后，再加 2 毫升 10％硫酸溶液，对测定结果有没有影响？。