运动生物化学实验指导实验一实验基本技术操作一、实验目的（一）了解实验室规则及注意事项。

（二）学习运动生物化学实验常用仪器的使用及清洗方法。

（三）学习721型分光光度计的使用方法。

二、实验原理运动生物化学是研究人体运动时体内的化学变化。

运动生物化学的实验方法基本上是化学的方法，用定量及定性的分析方法来观察机体内物质代谢的规律，所以实验时必须做到定性的洁净及定量的精确，因此实验取样要准确、样品要无污染。

对于相同物质和相同波长的单色光来说，溶液的光密度和溶液的浓度呈正比。

配制各种浓度的CuSO4溶液，然后在780nm波长下比色，测定各种浓度的CuSO4溶液吸光度值，并制作曲线图。

三、实验器材试管、CuSO4溶液、蒸馏水、721分光光度计、移液管、吸耳球等。

四、实验步骤（一）玻璃仪器的清洗。

（二）使用移液管的移液操作及721分光光度计的使用。

取4支大试管，编号，按表7-1进行操作：表7-1 CuSO4溶液的测定以CuSO4溶液浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标，将3种不同浓度的CuSO4溶液的光密度值分别点在坐标纸上，通过3点绘制成曲线图，并对实验结果进行分析。

五、注意事项（一）玻璃仪器清洗后注意检查，管壁不能留有水珠。

（二）使用移液管吸取液体时一定要缓慢平稳，不要太快、太猛。

六、作业与思考（一）玻璃仪器的清洗有哪些基本要求？实验二血红蛋白的测定血红蛋白（Hb）是红细胞中的一种重要蛋白质，1分子的Hb是由4分子的亚铁血红素和1分子的珠蛋白结合而成的。

Hb的主要生理功能是运输氧气（O2）、二氧化碳（CO2）和对酸性物质（H+）起缓冲作用，参与体内的酸碱平衡调节。

运动时机体需氧增加，故血红蛋白增加，有利于为组织提供氧气，促进物质的有氧代谢和带走CO2，而且也能起中和酸性的作用。

如果血红蛋白下降，氧供应减少，影响运动能力。

运动员安静时血红蛋白值与正常人没有明显差异。

一般人Hb的正常值男性为120-160g/L；女性110-150g/L。

临床上常用判断贫血的标准，即成年男性低于120 g/L；成年女性低于110 g/L；而14岁以下的少年、儿童，不论男女，均以低于120 g/L作为贫血。

血红蛋白的含量与运动员的身体机能状态、训练水平、运动负荷等关系密切，因此血红蛋白的含量高低直接影响运动员的身体机能和运动能力，尤其对耐力运动员的专项素质能力。

运动员在大运动量开始时，血红蛋白浓度出现明显下降，经过一段时间训练后，运动员身体机能逐渐适应大运动量训练，血红蛋白逐渐回升。

若训练一个阶段后Hb水平仍未回升或还有继续下降的趋势，应及时注意调整运动量，并加强营养补充。

因此，定期测定Hb的含量，有助于了解运动员的对负荷的适应、身体机能水平及营养状态等情况。

一、实验目的（一）学习取微量血的方法及血样的处理。

（二）掌握血红蛋白的测定方法。

（三）掌握运动训练中血红蛋白指标应用的评价及价值。

（四）巩固721分光光度计的使用方法。

二、实验原理（高铁氰化钾法）血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，高铁血红蛋白与氰离子结合成棕红色氰化高铁血红蛋白。

氰化高铁血红蛋白在540nm处有一个吸收峰，通过比色可以测定其光密度值，从而计算出血红蛋白浓度。

氰化高铁血红蛋白测定法是国际血液学标准化学委员会确定的检测血红蛋白含量的标准方法。

三、实验器材（一）氰化高铁血红蛋白稀释液：高铁氰化钾0.2g、氰化钾0.05g、磷酸二氢钾0.12g，用蒸馏水溶解并稀释至1000ml，置于棕色瓶中，瓶口塞紧后保存于冷暗处或冰箱，注意不能冷冻，至少可稳定1个月。

（二）氰化高铁血红蛋白标准液：（试剂盒）。

（三）95%酒精、75%酒精。

（四）一次性采血针、吸血管、棉球、试管、移液管、吸耳球、721分光光度计等。

四、实验步骤取3支大试管编号，按表7-2进行操作。

表7-2 血红蛋白的测定对实验结果进行计算，并分析讨论。

血红蛋白（g%）＝OD测／OD标×C标五、注意事项（一）试剂含有氰化物，为剧毒药品，配制和保存时必须严格注意安全。

实验后一定要洗手，并注意药品的处理，不能乱倒。

（二）取血部位对血红蛋白测定结果有很大影响，最好取手指血测定血红蛋白。

同时，取血时注意擦干、消毒采血部位，用自然流出的第二滴血。

最好固定采血部位。

（三）一次性采血针应一人一针，严防交叉感染。

六、作业与思考（一）运动训练对血红蛋白含量有何影响？（二）在训练周期中如何运用血红蛋白指标来评定？实验三血尿素的测定尿素是体内蛋白质、氨基酸分解代谢的终产物。

体内蛋白质和氨基酸分解代谢产生氨，氨代谢的主要去路是在肝脏合成尿素后释放进入血液，然后经血液循环至肾脏排出体外。

正常生理活动时，尿素的生成和排泄处于平衡状态，使血尿素浓度保持相对稳定。

正常人血尿素安静值为3.2～7.0 mmol/L。

运动员的安静值与普通人一致。

一般在30min以内运动时，血尿素变化不大，超过30min以上的运动蛋白质和氨基酸分解代谢加强参与供能，尿素生成增多，血尿素含量也较明显增加。

身体对运动负荷的适应性越差，运动时生成的尿素就越多。

在训练期可每天或隔天、或大运动量训练后次日晨测定血尿素，来评定运动员身体机能状况；也可测定每周一晨的血尿素以了解机体的恢复情况。

所以，血尿素氮可作为评定运动负荷量、机能状况及机体疲劳程度的重要指标。

一、实验目的（一）学习血尿素氮的测定方法，熟练微量血的采集技术。

（二）掌握血尿素氮指标在运动实践中的应用。

（三）学习离心机的使用方法。

二、实验原理在强酸性的条件下，去蛋白血滤液中的尿素与二乙酰一肟和硫氨脲共热，生成粉红色的二嗪化衍生物，其颜色深浅在一定范围内与尿素含量成正比，通过与同样处理的尿素氮标准溶液比色，可求出血尿素氮的含量。

三、实验器材（一）1%氟化钠溶液。

（二）10%三氯乙酸溶液。

（三）二乙酰一肟-硫氨脲溶液：称取二乙酰一肟 600mg，硫氨脲30mg，加蒸馏水溶解并加至100mL，置棕色瓶中，冰箱保存。

（四）尿素氮标准贮存液（1mg/mL）：精确称取干燥分析纯尿素0.2143g，用1%H2SO4溶解并稀释100mL，冰箱保存。

（五）尿素氮标准应用液（0.01mg/mL）：准确取标准贮存液1mL，加1%H2SO4稀释至100mL。

（六）混合酸液：浓磷酸（85%~87%）3.5mL、浓硫酸8mL，慢慢滴加于80mL水中，冷却加水至100mL。

（七）空白液：取1份1%NaF液和3份10%的三氯乙酸混合而成。

（八）一次性采血针、吸血管、消毒棉球、试管、移液管、吸耳球、水浴箱、离心管、离心机、721分光光度计等。

四、实验步骤（一）制备无蛋白血滤液：取2支离心管，按表3-1操作。

取指尖血0.02mL，立即置于含1%氟化钠0.48mL的离心管中，加入10%三氯醋酸1.5mL，充分摇匀。

立即以3000r/min的转速离心15min，分离血清。

表7-3 无蛋白血滤液的制备（二）取3支大试管，标明“空白管”、“标准管”、“测定管”，按表3-2操作。

表7-4 血尿素氮的测定对实验结果进行计算，并分析讨论。

五、注意事项（一）沸水浴时间对显色程度影响很大，应该严格控制好水浴时间，以水浴10min为宜。

（二）二乙酰一肟硫氨脲溶液不能久置，若有结晶析出应该重新配制。

（三）运动实践中利用这一指标评定机能恢复状况时，应分别在运动前、运动后即刻及次日晨取血。

若评定一个训练周期情况时，应在周期初始、中间及结束时分别取晨血跟踪测试。

（四）血尿素含量超过40mg%时，应将样品稀释后重新测定。

六、作业与思考（一）测定血尿素含量有什么实际意义？（二）血尿素含量变化与身体机能有什么关系？（三）如何通过测定血尿素氮浓度控制训练负荷？实验四血乳酸的测定乳酸是体内糖无氧酵解的终产物。

储存在肌肉中的糖原和葡萄糖，在无氧的条件下分解成乳酸。

乳酸经扩散进入血液，称为血乳酸。

在正常情况下，乳酸的生成与消除处于动态平衡中，正常人安静时血乳酸浓度保持在1～2mmol/L，运动员血乳酸安静值与正常人无差异，但在比赛前情绪紧张时，运动员的血乳酸安静值有可能出现升高至3mmol/L，这与体内的肾上腺分泌增多有关。

剧烈运动时，肌肉内糖的无氧分解加强，血乳酸浓度显著升高。

运动时血乳酸浓度的变化与所动用的能量系统有关。

以磷酸原系统供能为主的运动，血乳酸生成量较少，血乳酸一般不超过4mmol/L；以糖酵解系统供能为主的运动，血乳酸可达15mmol/L 以上；而以有氧氧化系统供能为主的运动，血乳酸在4mmol/L左右。

速度耐力性运动项目的高水平运动员，运动成绩好者，运动后血乳酸最大浓度值也高；耐力性运动项目的运动员，在完成相同亚极量运动负荷时，优秀运动员运动后血乳酸相对较低。

根据这一特点可用以评定运动员训练水平或选材。

可根据运动后血乳酸的消除速率来评定运动员有氧代谢能力，若恢复速度快，表示有氧代谢能力强。

因此，血乳酸含量的测定，对于从事体育工作的人来说是很重要的。

一、实验目的（一）掌握血乳酸的测定方法。

（二）初步掌握血乳酸的运动生物化学评定方法及意义。

（三）学习用掌式血乳酸分析仪测定血乳酸。

二、实验原理去蛋白血滤液，加浓硫酸共热，可使乳酸氧化成乙醛，在酮离子存在时，乙醛与对羟基联苯作用生成紫红色复合物，其显色程度与乳酸浓度成正比，故通过比色可以测定其光密度值，从而计算出血液中乳酸的含量。

三、实验器材（一）1%氟化钠溶液：1g氟化钠溶液溶于100ml蒸馏水中。

（二）10%三氯乙酸溶液：10g三氯乙酸溶于100ml蒸馏水中。

（三）浓H2SO4（分析纯、比重：1.838）（四）4%CuS04溶液：4gCuS04溶于100ml蒸馏水中。

（五）对羟基联苯试剂：将1. 5 g对羟基联苯溶于10ml的5%NaOH溶液中，待溶解后加水稀释至100ml，冷却后贮存于棕色瓶中。

（六）乳酸标准贮存液(1ml含1mg)：称取乳酸锂106.6 mg，溶于约10ml水中，加H2SO4（浓）2滴，移至100ml容量瓶，用水稀释至刻度，混匀。

置于冰箱保存。

（七）乳酸标准应用液(1ml含10 µg)：取1ml乳酸标准贮存液，用100 ml容量瓶加蒸馏水稀释至刻度即成。

此液临用时配制。

（八）乳酸空白液：取1%氟化钠溶液和10%三氯乙酸溶液按1∶3体积比混合而成。

（九）台式离心机、恒温水浴箱、水浴锅、离心管、721分光光度计、试管、移液管、滴管、吸血管、一次性采血针、消毒棉球、血乳酸分析仪。

四、实验步骤（一）制备无蛋白血滤液：取2支离心管，按实验三表7-5操作。

表7-5 无蛋白血滤液的制备（二）取3支大试管，标明“空白管”、“标准管”、“测定管”，按表7-6操作。

表7-6 血乳酸的测定（三）用掌式血乳酸分析仪测定血乳酸。

对实验结果进行计算，并分析讨论。

血乳酸（mg%）=OD测/OD标×100血乳酸（mmol/L）=血乳酸（mg%）/9五、注意事项（一）浓硫酸对显色影响很大，必须选用纯净浓硫酸。