2、显微镜下观察实验结果
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未凝血
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( )
乳鸡 类血
红 细 胞 非 哺
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凝血
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图2 左图为红细胞未发生凝集，右图为加入土豆凝集
素红细胞发生凝集
如图左所示，显微镜下观察到红细胞是分散的；加
入土豆凝集素后红细胞就发生凝集，由于许多的红
细胞凝集，重叠一起使得颜色变得更深。
2、2%鸡血红细胞的制备 ① 用烧杯取5ml 3.8%的柠檬酸钠溶液，取一
只鸡的鸡血于烧杯中，不断轻轻搅拌防止血 凝。（注：一只鸡的血大约50ml左右，按 10%的用量加入3.8%的柠檬酸钠。）
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② 用1.5ml的离心管取血液1ml，2000rpm 离心5min，用移液器轻轻吸取上清去除； 加入1ml生理盐水清洗红细胞，2000rpm离 心5min，重复洗2—3次（注：从离心机内 拿出离心管时切勿震荡，不要倾倒离心管 倒上清，以免红细胞流出。清洗红细胞时 用移液器缓缓抽打，防止红细胞破裂）。
反应和间接凝集反应两类。
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1.直接凝集反应
颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接 结合所出现的凝集现象。分为玻片法和试管法。
1)玻片法是一种定性试验方法。可用已知抗体来检测 未知抗原。若鉴定新分离的菌种时，可取已知抗体滴 加在玻片上，将待检菌液一滴与其混匀。数分种后， 如出现肉眼可见的凝集现象，为阳性反应。该法简便 快速，除鉴定菌种外，尚可用于菌种分型、测定人类 红细胞的ABO血型等。
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六、实验结果与分析
1、肉眼观察实验结果
图1 左边是血红细胞加PBS缓冲液；中间是 血细胞加凝集素；右边是血红细胞悬液
（如图1所示，加土豆凝集素的血红细胞在肉眼下明显可以 看到红细胞发生凝集，未加土豆凝集素的红细胞则没有变 化，加入PBS缓冲液的红细编辑胞ppt可以保存时间较长。） 15
实验三 细胞凝集反应
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一、实验目的
学习研究细胞凝集反应的方法,了解细胞发 生凝集反应的原因。
了解颗粒性抗原与可溶性抗原凝集反应的 原理。括由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的三 种类型的细胞凝集现象。
凝集素（lectin）是从各种植物的种子和动物组织中提取 的糖蛋白或结合糖蛋白，因为能凝集红细胞，故名凝集 素。
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③ 在小试剂瓶中加入9.8ml生理盐水，用移 液器吸取200μl血红细胞加入小试剂瓶中， 混匀，即是2%的红细胞悬液，贴上标签备 用（注：吸取红细胞加入试剂瓶时可吸取 生理盐水清洗几次吸头，使得红细胞全部 在悬液中）。
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凝集反应现象
用移液器吸取红细胞悬液，在三片载玻片 上各滴一滴，其中一片加一滴土豆凝集素， 一片再加一滴PBS缓冲液，充分混匀，另 外一片只有红细胞悬液做空白对照，盖上 盖玻片，待干后于显微镜下观察血细胞凝 集现象（注：红细胞悬液放置一段时间会 发生沉降，取用之前应当轻轻摇匀）。
生理盐水：称取0.9g NaCl加水定容至 100ml。
3.8%柠檬酸钠溶液：称取3.8g柠檬酸钠 （或是4.33g带结晶水的柠檬酸钠）加水定 容至100ml。
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五、实验步骤
1、凝集素的制备：用1/100电子天平称取2g 去皮土豆块茎，加10ml PBS缓冲液在烧杯中 浸泡2h，粗提液中即含有土豆凝集素。
另外，凝集素还具有多价结合的能力，能与 荧光素、酶生物素、铁蛋白、胶体金结合 而不影响其生物活性，可用于光镜或电镜 水平的免疫细胞化学研究。
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三、相关理论知识
颗粒性凝集反应（agglutination）是一种血清学
反应。颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等） 与相应抗体结合，在有电介质存在的条件下，经过一 定时间，出现肉眼可见的凝集小块。参与凝集反应的 抗原称为凝集原，抗体称为凝集素。可分为直接凝集
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七、注意事项及改进 （1）离心机使用时，要将配平后的离心管对称 放置在离心机内，禁止未配平就放入离心机和非对
称放置离心管。 （2）从离心机内拿出离心管时切勿震荡，不要
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2)试管法是一种定量试验的经典方法。可用已知抗原来 检测受检血清中有无某抗体及抗体的含量。用来协助临 床诊断或供流行病学调查研究。操作时，将待检血清用 生理盐水连续成倍稀释，然后加入等量抗原，最高稀释 度仍有凝集现象者，为血清的效价，也称滴度，以表示 血清中抗体的相对含量。诊断伤寒、副伤寒病的肥达氏 反应（Widaltest）、布氏病的瑞特氏反应（Wright test） 均属定量凝集反应。
凝集素最大的特点是能识别糖蛋白和糖脂中，特别是细胞 膜中复杂的碳水化合物结构，即细胞表面的糖基。通过 与细胞表面的糖分子相连，在细胞间形成桥，从而引起 细胞的凝集。一种凝集素编只辑pp对t 某一种特异的糖基具有3
特异结合的能力，如刀豆素A与吡喃糖基甘露 糖结合，马铃薯凝集素专一结合的是N-乙 酰氨基葡萄糖二聚体和N-乙酰氨基半乳糖。 加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝 集作用。
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四、实验用品
1、器材和仪器 仪器：电子天平，大烧杯，小烧杯，显微镜，移液
器，离心机，玻璃棒，镊子。 耗材：10ml小试剂瓶，载玻片，盖玻片，1.5ml离心
管，擦镜纸，吸头。
2、材料： 马铃薯块茎、鸡血
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2、实验试剂：
PBS缓冲液：称取7.2g NaCl ，1.48g NaH2PO4 ，0.46g KH2PO4 ，用蒸馏水定 容至1000ml，调pH为7.2。
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2.间接凝集反应
将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无 关的、一定大小的颗粒状载体的表面，然后与相应 抗体（或抗原）作用。在有电介质存在的适宜条件 下，即可发生凝集，称为间接凝集反应。用做载体 的微球可用天然的微粒性物质，如人（O型）和动 物（绵羊、家兔等）的红细胞、活性炭颗粒或硅酸 铝颗粒等；也可用人工合成或天然高分子材料制成 ，如聚苯乙烯胶乳微球等。由于载体颗粒增大了可 溶性抗原的反应面积，当颗粒上的抗原与微量抗体 结合后，就足以出现肉眼可见的反应，敏感性比直 接凝集反应高得多。