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三、实验用品
• 1 ．器材：显微镜、解剖器械、小烧杯、载玻片、盖玻片、 滴管、吸水纸 • 2 ．材料：凝集---土豆块茎、鸡红细胞 吞噬---小白鼠、鸡红细胞
• 3 ．试剂：鸡红细胞悬液，凝集素粗提液，PBS缓冲液，
Alsever血液保存液，2%的可溶性淀粉溶液， 0.85%生理盐水，瑞氏染液(美蓝-伊红Y)
专一性结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞
分裂的作用。 • 凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连
接，在细胞间形成“桥”的结果。凝集素与糖分子
结合有一定的专一性和结合价，并与细胞膜上受体 的分布有关。
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二、实验原理
• 吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是
高等动物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物 内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬 功能。当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬 细胞由于具有趋化性，会向异物处聚集，将其内吞 入细胞质，形成吞噬泡，然后吞噬泡与溶酶体融合， 将异物消化分解。 • 通过观察细胞对鸡红细胞的吞噬，计算吞噬百分数 和吞噬指数，可以分析判断动物个体的免疫水平。
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实验 9 细胞凝集反应及细胞吞噬
一、实验目的
1．掌握细胞凝集反应的实验方法及细胞凝聚的原理。 2．观察凝集的现象。 3．了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理。 4．2
二、实验原理
• 动物细胞表面的糖蛋白、糖脂中的糖链伸向膜表面，
它们是细胞识别、细胞免疫及细胞接触抑制现象的 必要组分。凝集素是一类含糖的(少数例外)并能与糖
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四、实验步骤
1、细胞凝集
• 2%鸡红细胞悬液制备（已完成）
• 凝集素粗提液制备：将去皮的土豆块茎2 g在10 mL PBS缓冲
液中浸泡2 hr后，PBS液中含有可溶性土豆凝集素。 • 细胞凝集反应现象的观察：用滴管吸取土豆凝集素粗提液和 2%鸡红细胞液各一滴，置载玻片上，充分混匀，静置20 min 后于低倍显微镜下观察。
• 颈椎脱臼法处死小鼠，暴露小鼠腹腔，将内脏推向一侧， 用滴管吸取腹腔液。 • 滴1滴腹腔液在干净的载玻片上，静置5-10分钟，使腹水 细胞贴壁。 • 待其稍干后，进行瑞氏染色。加上盖玻片，显微镜下观察。
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五、实验结果
1、细胞凝集
对照组 实验组
PBS+2%血细胞液
凝集素+2%血细胞液
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五、实验结果
2、细胞吞噬
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六、讨论与思考题
• 绘图表示镜检时你所能看到的各种细胞类型及其形态。 • 细胞凝集实验中，为什么对照组使用PBS溶液作对照？ • 描述小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，并分 析吞噬作用的生理意义。
实验组 对照组
凝集素1滴 PBS溶液1滴
红细胞悬液1滴 红细胞悬液1滴
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四、实验步骤
2、细胞吞噬
• 实验前3天，每天向小鼠腹腔注射2%的可溶性淀粉1mL。 实验前1小时，向腹腔内注射1%鸡红细胞1mL，轻揉腹部， 使鸡红细胞分散（已完成）
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四、实验步骤
2、细胞吞噬
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五、实验结果
1、细胞凝集
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五、实验结果
未染色的： 鸡红细胞是淡黄色、椭圆形有核的细胞；较大的圆形或不规 则的细胞，表面具有许多似刺毛状的小突起的是巨噬细胞。
2、细胞吞噬
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五、实验结果
2、细胞吞噬
鸡红细胞被消化程度（染色后）
• 未消化：鸡红细胞核清晰，着色正常， 胞质浅红色，细胞核蓝或紫红色 • 轻度消化：鸡红细胞胞质深黄绿色，核 固缩，紫红色 • 重度消化：鸡红细胞核模糊，核肿胀， 染色淡，胞质浅染，核呈浅灰黄色 • 完全消化：鸡红细胞核溶解，染色极淡， 巨噬细胞内只见形状类似鸡红细胞大小 的空泡，边缘整齐，核隐约可见。