RIB200
570
595～600
四甲基异硫氰 酸罗丹明
TRITC
550
620
橙红色
荧光显微镜光路图
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
二 实验内容： 荧光抗体法诊断猪瘟 荧光显微镜的使用
实验材料与试剂： 三 实验材料与试剂： 1．猪瘟荧光抗体： 购置于中国兽药监察所。 2．0.01Mol/L pH7.2PBS液 3．缓冲甘油：优级纯甘油9份和碳酸盐缓冲液1份 混合而成，高倍镜下观察使用。 4．碳酸盐缓冲液： 0.5Mol/L 碳酸钠 1份 0.5Mol/L 碳酸氢钠 3份 混合即可。 5．荧光显微镜
实验四 荧光抗体检测技术
一、实验原理
免疫荧光技术是血清抗体以化学方法与荧光素 结合后，仍保留其免疫特性，当带有荧光素的抗 体与抗原结合后，则在抗原的部位有荧光抗体的 沉着，在荧光显微镜下观察就可以看到发亮的荧 光。 常用的荧光素：
名称 异硫氢酸荧光 素 四乙基罗丹明 缩写 FITC 最大吸收波（nm） 490-495 最大反射波（nm） 520-530 呈现颜色 明亮的黄绿 色 橘红色
四 实验操作方法 ： 1．组织涂片（切片 切片）制作： 取一点猪瘟脾淋疫苗均匀的 切片 涂匀空气中自然干燥后，立刻在室温下放入纯丙酮固定 10min，取出后PBS液轻轻漂洗数次，自然干燥后染色。 如不能及时染色，可用塑料纸包好，放入低温冰箱中保 存。
2．荧光抗体染色： 滴加猪瘟荧光抗体（工作浓度）2~3 滴，以覆盖为度，放入湿盒中，37℃感作30min（切忌 染色液干涸）。以PBS液3×1min冲洗。 3．观察结果：染色片半干时，放置于荧光显微镜下 进行观察。 高倍观察：滴加缓冲甘油封片，置荧光显微镜下观察。
五 实验结果的判定： 将染色好的组织片置激发光为蓝光荧光 显微镜下观察。 阳性结果：呈明亮的翠绿色荧光。 阳性结果 阴性结果：无荧光或荧光微弱。 阴性结果
六 分析与讨论 免疫三大标记技术（免疫酶技术、免疫 放射技术、免疫荧光标记技术）在医学诊 断以及生物学进展研究中的重要应用。 请举例说明。
组织切片制作： 组织切片制作： 取新鲜的扁桃体与肾组织块， 用冰冻切片机制成5µm~7µm原冰冻组织切 片，粘于清洁的载玻片上（0.8 mm ~1.0mm），空气中自然干燥后，立刻在室 温下放入纯丙酮固定15min，取出后PBS液 轻轻漂洗数次，自然干燥后染色。如不能 及时染色，可用塑料纸包好，放入低温冰 箱中保存。