银杏叶的生物碱提取与分析作者王亚婷指导教师陈科摘要：为了充分开发利用银杏叶的药物价值，本试验的研究目的是对银杏叶中生物碱的定性检测，并确定其最适宜提取工艺条件。
此试验方法是采用一定条件下的乙醇溶液来提取银杏叶中的总生物碱，同时探讨溶剂浓度，提取时间和料液比三个单因素对生物碱提取率的影响，并且通过正交实验确定生物碱最佳提取条件。
结果表明：在银杏叶中，除去黄酮类，二萜内酯类和其它物质，含有生物碱活性成分。
在溶剂浓度85%，提取时间6h，料液比1：15时为生物碱的最佳提取条件。
关键词: 银杏叶，生物碱，提取条件Extraction and analysis of alkaloids in Ginkgo biloba leaves Abstract：For the full development and utilization of Ginkgo biloba medicinal value,The object of experiment is to qualitatively alkaloid in the leaves of Ginkgo biloba detection. At the same time to determine the optimum extraction conditions of the alkaloid. the method is used to extract of Ginkgo biloba leaf alkaloid by ethanol solution under certain conditions,the effects of different ethanol concentrations,extrating time and solid-solution ratios on the extraction of alkaloid were also observed. Furthermore, an orthogonal experiment was obtained by orthogonal experimental. The result show that: the Ginkgo biloba leaves were found to contain alkaloid beside flavones and terpene lactones and other caffeine. The optimum extraction conditions of the alkaloid are as follows: 80% ethanol, 8 h time, 1:20 solid-solution ratios.Key words: Ginkgo biloba leaves ，Alkaloid，The extraction condition银杏是我国特有的树种，因其具有重要的药物价值，近年来对银杏的开发已成为国际的热点。
银杏叶又名白果叶、公孙叶，为最古老的中生代孑遗植物银杏Ginkgo biloba L的干燥叶[1]。
最初研究银杏叶化学成分的是在20世纪20年代，日本FURAKAWA和中西香秀，他们从银杏叶中分离出多种黄酮类和二萜内酯类。
国外银杏叶产品发展于20年代70年代，德国Schwabe公司利用溶剂萃取专利技术生产标准银杏叶提取物（EGb761），其中银杏黄酮大于24%，内酯大于6%，银杏酸小于5×10-6，并开发Tebonin forte制剂[2]。
银杏叶中化学成分非常复杂，种类较多，并且有许多成分具有生理活性，银杏叶主要化学成分有黄酮类，萜类、银杏醇、莽草酸、谷甾醇，此外，还有生物碱、多种氨基酸、多糖等[3]，在医学上银杏叶中的生物碱具有收缩血管及扩张瞳孔的药理作用。
对于银杏叶中的生物碱，它们当中大部分的碱性都较弱, 不能直接溶于水, 能溶于氯仿、乙醚、乙醇、甲醇等有机溶剂, 同时易溶于酸性介质, 生成可溶性盐。
生物碱（alkaloid）是存在于自然界的一类含氮的有机化合物，大多数有复杂的氮杂环状结构，显碱性，并且具有生理活性[4]。
氮素多包含在环内，有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一，按其药用作用主要有以下4个方面[5]：(1) 抗肿瘤作用（2）抗菌作用（3）作用于神经系统（4）作用于心血管系统。
另外有些不含碱性而来源于植物的含氮有机化合物，有明显的生物活性，故仍包括在生物碱的范围内。
目前，关于银杏叶中生物碱的研究比较少见，因此本文通过定性分析，单因素实验和正交实验来研究银杏叶中的生物碱，为以后的研究提供方法。
生物碱是一类具有生理活性的物质，因此银杏叶中生物碱的研究和分析为以后银杏叶的充分利用提供了基础。
植物：银杏（Ginkgo biloba ）采集地点：皖西学院采集时间：2012.11.10鉴定人：陈科1.材料与方法1.1实验材料1.1.1 实验对象：采自皖西学院银杏大道上的银杏叶，生长环境基本一致。
1.1.2实验仪器电子天平HANGPING FA1004N型上海精密科学仪器有限公司制造电热恒温干燥箱GJ14-DGF3006型金坛市荣华仪器制造有限公司制造精密酸度计PHS-3CT型上海大普仪器有限公司紫外可见光分光光度计752型上海光谱仪器有限公司制造循环水真空泵SHZ-DIII型郑州英峪予仪器有限公司电热恒温水浴锅SY2-4型北京市医疗设备厂制造恒温磁力搅拌器HJ-3型江苏金坛医疗仪器厂旋转蒸发仪RE-52B型常州诺基仪器有限公司光谱扫描仪DGS-III型上海泰伦分析仪器有限公司索氏提取器，碾钵，烧杯，烧瓶，滤纸，量筒，布氏漏斗，容量瓶，锥形瓶，移液管，洗耳球等1.1.3实验试剂无水乙醇，甲醇，盐酸，石油醚，氯仿，氨水，碘，碘化钾，磷钼酸试剂，以上试剂都是分析纯。
蒸馏水（生工学院水处理室提供）。
1.2 实验方法1.2.1生物碱试验设计生物碱具有环状结构，一般难溶于水，有一定的旋光性和吸收光谱，大多有苦味，与酸结合成盐时则易溶于水和醇[6-7]。
游离生物碱的极性较小，易溶乙醇，甲醇等有机溶剂。
利用上述性质，试验采用酸性的有机溶剂提取银杏叶中的生物碱。
由于甲醇的沸点比乙醇低，极性比乙醇大，对生物碱盐类的溶解性能也比乙醇好，但是它对视神经的毒性很大，所以选用乙醇作为提取剂[8]。
在预试验的过程中对生物碱进行定性试验，利用生物碱与某些特殊的试剂有显色反应来确定银杏叶是否含有生物碱。
同时，选取溶剂浓度，提取时间和料液比三个因素进行单因素和正交试验，从而刷选出最佳的条件。
1.2.2 生物碱提取过程（1）原料预处理从皖西学院银杏大道采取适量的银杏叶，用清水洗净置阴凉处晾干。
然后将银杏叶放进电热恒温干燥箱干燥2 h[9],取出碾碎。
称取一定量的银杏叶用滤纸包好，用石油醚浸泡一段时间，然后弃去石油醚溶液，将银杏叶置于通风阴凉处蒸发残留石油醚，晾干银杏叶[10]。
（2）提取过程利用索氏提取器，多次提取生物碱，可以反复利用溶剂，提取效率高，并且操作方便[11]。
将上述处理过的银杏叶置于索氏提取器中，加入已设定的一定浓度乙醇溶液，加热冷凝回流数小时后，用旋转蒸发器将提取的乙醇溶液蒸发成胶状物，然后用蒸馏水稀释胶状物，加入稀盐酸调节pH值在2~3之间，搅拌均匀，用真空泵抽滤。
滤液再加入10%氨水调节pH值在8~9之间，用氯仿萃取2次，收集氯仿层，萃取过的溶液用旋转蒸发器蒸发回收氯仿，残留物就是生物碱的粗提取物。
（3）定性检测上述方法提取出的生物碱用蒸馏水稀释，再加入稀盐酸调节pH值在2~3之间，用乙醚萃取2~3次，除去乙醚层，在水层中加入10%氨水调节pH值在9~10之间，再用氯仿萃取，合并氯仿层，用旋转蒸发器回收氯仿，残留物即为较纯的生物碱。
较纯的生物碱用稀酸水稀释，然后分别量取二份等量溶液置于烧杯中，向烧杯中分别加入碘-碘化钾试剂，磷钼酸试剂。
观察烧杯中是否出现明显现象。
该试验现象为加入碘-碘化钾试剂地溶液有红棕色沉淀生成；加入磷钼酸试剂，溶液中有鲜黄色沉淀生成。
结果表明银杏叶中含有生物碱活性成分。
2.结果与分析2.1 生物碱检测波长的确定以0.1mol/ L的盐酸溶液为空白液，用0.1mol/ L的盐酸溶解样品液，然后在波长200~400nm范围内扫描,得到紫外光谱图。
根据紫外光谱图确定溶液最大吸收波长，如图1所示。
由图可知银杏叶中生物碱的最大吸收波长是350.00nm,故选择350.00nm为测定波长。
图1 样液光谱扫描图2.2 绘制标准曲线精密称取秋水仙碱标准品10mg,置于10ml容量瓶中，加入甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
然后从中吸取1ml溶液，用95%的乙醇定容至10ml容量瓶中，此时标准溶液浓度是0.1mg/mL。
然后再分别吸取标准溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml于九个10ml容量瓶中，并加入0.1mol/ L盐酸补足至10ml，摇匀，由此制成梯度浓度的溶液，如表1所示。
以95%的乙醇为空白，在350nm处测定吸光度，以吸光度（A）为纵坐标，浓度（mg/mL）为横坐标，，绘制标准曲线，如图2所示，得到回归方程是y=10.872x+0.008表1 标准曲线值测量结果秋水仙碱溶液0 1 2 3 4 5 6 7 8体积∕ml0 0.010.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 秋水仙碱质量mg∕ml吸光度值0 0.116 0.226 0.342 0.441 0.593 0.613 0.774 0.881图2 生物碱的标准曲线。