葡萄糖氧化酶法测定操作规程
1实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸,并成成过氧化氢。
过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧,并使色原性氧受体4-氨基安替比林(4-AAP)和酚去氢缩合为红色醌类化合物,即Trinder反应。
在500nm处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。
GOD
葡萄糖+O2→葡萄糖酸+H2O2
POD
H2O2+4-AAP+酚→红色醌类化合物+H2O
2临床意义1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。
2.病理性高血糖(1)糖尿病患者。
(2)内分泌腺功能障碍:甲状腺功能亢进,肾上腺皮质及髓质功能亢进等。
升高血糖的激素增多引起的高血糖,现已归入特异性糖尿病中。
(3)颅内压增高:颅内压增高刺激血糖中枢,如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。
(4)脱水引起的高血糖:如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。
3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。
4.病理性低血糖(特发性功能性低血糖最多见,依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等)。
(1)胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等,使胰岛素分泌过多。
(2)对抗胰岛素的激素分泌不足,如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。
(3)严重肝病患者,由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下,肝脏不能有效地调节血糖。
3实用仪器蓝韵200(L Y-C200)
4储存条件及有效期试剂盒应避光密封储存在2--8℃环境中,有效期为12个月。
开封后,上机在2--8℃避光保存其有效期为28天。
5操作步骤
5.1、全自动生化分析仪操作步骤:参数设置→试剂装载→校准→质控→样品加载→测定→结果审核→报告。
5.2、校准:采用纯化水或生理盐水和校准品两点校准。
当试剂更换批号、出现质控漂移、仪器做完保养后及重要零件更换时,须重新校准。
5.3、结果计算:全自动生化分析仪会自动给出检测结果。
5.4、质控程序:建立质控体系,选用适当的质控品进行质量控制。
测定结果在质控范围内,方可进行样本测定。
6参考范围 3.89—6.11 mmol∕L
7方法评价本法线性范围0.10 mmol∕L—25.00mmol∕L,精密度批内CV ≤3.00%,批间CV≤4.00%。
准确度相对偏差在±10.0%。
8注意事项1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异,溶液中的葡萄糖约36%为α型,64%为β型。
葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。
葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量,但不能直接测定尿液葡萄糖含量,这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高,可干扰过氧化物酶反应,造成结果假性偏低。
2.严重黄疸.溶血及乳糜烂血清应先制备无蛋白血滤液,然后再进行测定。