（ 三）叮嚏橙荧光染色法影响因素的探讨
改变 ｐ 值可引起荧光色素光谱的变 化， Ｈ 并明显影响荧光色素吸收光能的能力和荧光效
日 本的 Ｈｙｈ （９１＇ ａｓ １８）， ａｉ ｔ首先将叮吃橙荧
光染色法应用微核试验。哺乳动物骨髓从原红
细抱发展到成熟红细胞经历了不同的阶段，其 但 无细胞核，二者因血色素含量等不同因而染 色不一，故容易区 分。微核试验的主要观察指 标是多色性红细胞中的微核。在 Ａ． Ｕ 染色中 多染红细胞染成紫红或桔红色， 微核呈绿色， 色
锭橙贮存液，放人 ４ ℃冰箱中备用。临用时 １
份贮存液加 １ 份 ｐ ． ５ Ｈ６８的磷酸缓冲液。染色 液按常规配制。
细胞 （ｌ ｃ ｏ ａｃ ｔｏｙｓ 红色或橙 ｐ ｙ ｒ ｔ ｅ ｈ ｃｅ ｏ ｈ ｍ ｉ ｒ ｒ ｔ ）呈 ｙ
色 但无 的 式色 胞（ ｒｏ ｒ ａ ｅ ， 核 正 红细 ｎｍｃｏ ｔ ｒ ｏ ｈｍ ｉ － ｃ
］二 １ ２ ・ ・ ２ ， ・ 一ｎ ・
复合染料中的嗜天青颗粒很难与微核相鉴别， 影响观察；浓度太低则需延长染色时间，或着 影响结果的判断。本文对来自同一小鼠的骨髓 色效果不佳。 温度对荧光效应亦有一定影响，
涂片进行了 ２种不同染色方法的对比研究，发 在恒温下迸行实验能获得稳定 的结 果。 如室 现在溶媒对照或给药的 阴 性微核 试验组，２ 温下，必需根据温度的改变，适 当调整染色时 ・
盐水
６０ ０ ０
８
ＰＣＦ
６０ ０ ０ １０ ６
６０ ００ １７ １ １ ５ ９．
６０ ００ ７６ １５ ．
６ Ｏ ００
ｊ
Ｍ Ｎ ＰＣＥ
人． Ｏ
％ ｏ Ｐ值
ＦＣ Ｅ Ｍ ＰＣ Ｅ Ｎ
２ ．７ ６６ ＜００ ．１ ６０ ００
１７ ４ ２ ５ ４． ＜ ０． ０１
１７ ．５
ｙ ｒ ｙｓ ｔ ｏ ｔ）不着色。Ｇｅ ｓ ｈ ｃｅ ｉ 。染色的骨髓涂片和 ｍ Ａ Ｏ 染色完全不同， ． 细胞核及微核呈青紫色，
微核呈圆形或卵圆形 ， 也有呈不规则形， 边 缘整齐平滑， 染色与主核结构完全一致， 存在于 胞浆中。微核直径 １ ｐ不等，一般不超过主 －３
丝裂霉素Ｃ ｉｍ ｃ Ｃ ，日 （ ｔ ｙｉ ） 本产， Ｍ ｏ ｎ 溶于 ｒ ｕ ） 瑞典产，混悬于玉米油中。 色经丙钠 ｉｍ ｄ （ｓｒ ｏｌａｓ， Ｉｃ ｍ ｇ ｃｉ 中国医学科学院药物研究所 ｏ ｏ ｙ ｔ）
细胞成份结合后，可以发射红、 黄、 、 橙、 绿 蓝各 色荧光〔 ， ， 。叮咤橙荧光染色对 Ｄ ＮＡ， Ｒ ＮＡ 和 酸性粘多糖染色的特异性问题，很多学者进行 了较深人的探讨。实验证明，经脱氧核糖核酸 酶处理的标本， 细胞核的黄一黄绿色荧光消失； 经核糖核酸酶处理的标本，细胞内的桔黄一桔 红色荧光消失。肥大细胞的红色荧光对两种酶 的处理无影响。荧光色素叮咙橙是一种良好的 细胞化学染料， ２种核酸有稳定的分色性能， 对
２种核酸含量的变化。在化学和辐射等诱变剂
作用下， 可引起 ＤＮＡ 双链的解开和大分子的
胞所含的铁离子有熄灭荧光的作用， 因此 Ａ Ｏ
染色不着色，如若观察正式性红细胞仍需进行 Ｇｅ ａ染色， ｉ ｍｓ 此外还需一定荧光设备，在普及 上有一定困难。
解聚， Ｎ 结构和含量的变化， Ｄ Ａ 可以从细胞的 形态和细胞化学等方面观察。 （ 二）ｏ咤橙荧光染色法在徽核试验 中的 ｆ 应用价值
率，所以荧光染色时必需选用各种荧光染料最
影响， 认为 ｐ Ｈ为 ６８ ．的磷酸缓冲液对叮陡橙荧 光色素是合适的， ｐ 高于 ７ｄ ．或低于 而 Ｈ ．－７ － ４
中多色性和正式性红细胞均为未成熟 红细胞， 适的 ｐ 值。我们摸索了各种 ｐ 对染色的 Ｈ Ｈ值
６ －６ 染色效果均不佳。 溶液中荧光的强度 ． ． ０ ４
（次 ） 锌 娜 狠
性致突／ 致癌剂特点。
２种不同染色方法均显示色轻丙钠对小鼠
骨髓细胞无明显作用，实验与对照组含微核的
多色性红细胞无明显差异’Ｐ ０ ５ ， （ ＞ ０） 色经丙 ．
钠微核试验结果为阴性。
从表 ２ 对比资料中发现，在玉米油对照组
中，Ｇｉ ｓ ｅ ａ染色法计数的微核率高于 Ａ． 染 ｍ Ｏ
核的 １５ ／， ／－１３ 以单个为多见，有时也见２ 个
或 ２个以上者。 ２种不同染色法所观察到的微 核在形态学上无明显差异。丝裂霉素 Ｃ和甲基
Ｈ ａ ｇ ｏ ｊｎ ａ． ＇ ｅ ｐ ｌ ａｉｎ Ａ ｒ ｕ ｎ Ｎｉｎｕ ｅ ｌ ｒ Ａ ｐｉ ｔ ｏ ｅｉ ｔ ： ｈ ｃ ｏ ｆ －
ｄｎ Ｏ ａｇ Ｆｕｒ ｃ ｔ ｉｉ ｉ Ｍｉｏ ｕｌ ｓ ｉ ｒ ｅ ｏｅ ｅ Ｓ ｎ ｇ ｅ ｎ ｌ ｓ ｎ ｔ ｎ ｎ ｃ ｎｃ ｕ ａ ｒ ｅ
工。 夕 １
１１ 。７
１． ３ ３
＜００ ．１
６０ ０ ０ ９２ １ ３ ５． ３
＜０ ０ ．１
６０ ０ ０ ５２ ８． ７ ６ ＜ ０． ０１ ４０ ００ １ ４ ３． ２５
＞０ ０ ．５
６０ ０ ０ １ ４ ２． ３
＞０ ０ ．５
６０ ００ １ ４ ２． ３ ＞ ０． ５ ０
＞ ０．５ ０
６０ ００ ９ １５ ． ＞ ０． ０５ ６ ００ ０
不 着色
橙 红色 荧 光 青紫 色
绿色 荧光 紫红 色
菊红 色
茉麟所诱发的微核在形态学上也无明显差异。 （ 二）三种化学药品微核试验的结果 丝裂霉素 Ｃ和 甲基茉脐对小鼠骨髓细胞有
明显诱变作用，诱发多色性红细胞中微核的增 加，且有明显的剂量效应关系（ ２ 表 ，图 １３０ －） Ａ Ｏ和 Ｇｅｓ ． ｉ ａ染色的结果是一致的， ｍ 符合阳
讨
论
（ 一）Ｐ吮橙荧光染色法的特异性 ｆ 叮绽橙是一种常用的荧光色素，它和不同
． ２８ 一
，一 ～ 一 ～
一决 ）铃 娜 拟 拦 坦 ～锌
（次
（ ｇｋ ） ｍ ／ｇ
图 ２ 两种 不 同 染色 方法 对 甲基节 阱 微 核 率的 影响 ・ 一 Ａ， 染 色 ０ － 一 Ｇｉｕａ 染 色 － ｅｓ ｒ
（ ｇｋ ） ｍ ／ｇ
图 ３ 两种不同染色方法对色经 丙钠微核率的影响
・ 一 Ａ． 染 色 ０ － 一 Ｇｉ ａ 染色 － ｅ ｍｓ
并与含有硫酸基的酸性粘多糖结合呈现红 色。 色中的假阳性确实是存在的。而叮ｐ橙荧光染
叮淀橙荧光染色法能反映出细胞的清晰结构和 色， 由于着色是特异的，因此避免了以上缺点。 但荧光染色也有它的局限性，由于正式性红细
遗传
１ Ｒ ＤＴ Ｓ ｅｉ ） （） ７ ｓ ８ １ Ｅ ＩＡ （ ｉ ｇ ８ ：２ 一ｉ １ ６ Ｆ Ｓｉ ｎ ４ ９
ｎ咤橙荧光染色法在微核试验中的应用 丫
黄念 君 陈 世明 应 平 贤
（ 卫住 部药品 生物 制 品检 定所 ， 京 ） 北
染色体或染色单体断裂后所遗留下来的断
酸缓冲液分色 １ 分钟。 荧光显微镜 （ －３ 日本
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Ｎｉｏ Ｂ 激发滤片和 ５５ 阻断滤片） ｋｎ Ｖ １． Ｗ 镜检，
片可通过细胞分裂在一定时期内保留于子细胞
中； 纺锤体细胞器功能失调也可形成断片； 这些 断片称为微核。小鼠体内的微核试验就是利用 微核来观察染色体畸变的另一种表现形式。由
激发光源为 Ｈ Ｏ ｆ瓦高 Ｂ １ｌ 压汞灯 （ ０ 西德奥斯
２
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（ 三）观察与判断 在油镜下， 每只动物计数一００ １ ０ 个多色性红 ， 细胞及其带微核的细胞数， 以千分率表示之。 最
后经统计 处理 ， 判断结 果。
于 Ｇｅ ｓ ｉ ａ染色法简单， ｍ 快速、经济、 因而被广
泛采用。 但 Ｇｅ ｓ ｉ ａ染色法特异性较差，非特 ｍ 异着色颗粒有时很难与微核相区别，影响结果 的判断 ，为此有必要建立一种更加特异的观察 方法。近年来荧光显微技术在细胞学、 免疫学 、 微生物学等多个领域中得到广泛应用，我们参 照有关文献〔 ４ ｙ １ ， 咤橙 （ ｃｄｎ Ｏ ａｇ）荧 －将ｐ Ａ ｒ ｉｅ ｎｅ ｉ ｒ 光染色法应用于微核试验 ，并获满意的结果。
Ｔ ｅｓ ｔ
本文 于 １ ８ 年 １月 ２ ９， ９日收 到。
２７
表 １ 不同染色方法对小鼠骨翻涂片的染色 结绷
有核 细 胞 染色 方法
核
Ａ ，？ （ Ｇ ｉｍ ｃ ｃ ａ
一 多性 染
浆 红 细胞
正式性 红
细 胞
Ｍｌ 内 胞
微
ＲＮ Ａ
核
绿 色荧光 紫 蓝色
橙红色荧光
不 同蓝色
紫红 色荧 光 灰 色
衰 ２ 不 同 染色 方法 对 徽核 试验 结果 的影 响 甲基羊 阱（ ／ ｇ 川９ ｋ ）
染 色方法
（ ／ｇ ｍｇｋ ）
图 １ ＭＭＣ 所诱 发的 微核 效应 曲线 （ Ｏ 染 色） Ａ．