检验方法—分离培养
• 粪便标本－→高盐甘露醇平板 • 菌落特征：光滑型、中等大小、淡黄色
菌落
2020/6/21
检验方法—分离培养
• 血标本－→增菌（葡萄糖肉汤）－→分 离培养（血平板）
• 生长现象：混浊、胶胨状凝固、溶血
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金葡菌的鉴定依据
• 血平板上金黄色色素、β-溶血环 • 血浆凝固酶 + • 发酵甘露醇 + • 耐热核酸酶 +
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细菌鉴定的基本程序
标本
直接涂片 革兰染色镜检
分离培养 取可疑菌落
鉴定试验和药敏试验
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结果报告
标本采集
• 根据病种不同，采集不同标本 脓液、创伤分泌液、穿刺液、血液、尿 液、痰液、脑脊液、粪便
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检验程序
脓、穿刺液、尿液、痰 脑脊液 血液
结合凝固酶（位于菌体表面）
纤维蛋白原
纤维蛋白
细菌凝集
• 金葡菌凝固酶试验均为阳性 • 凝固酶试验是鉴定金葡菌的重要标志
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所致疾病
• 侵袭性疾病 • 化脓性感染：疖、痈、甲沟炎、中耳炎
、脑膜炎、败血症等 • 毒素性疾病： • 食物中毒、假膜性肠炎等
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免疫性
• 有一定天然免疫力 • 病后获得的免疫力作用不强、不持久
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葡萄球菌传统分类
产生溶血毒素
金黄色 葡萄球菌
+
表皮 葡萄球菌
－
腐生 葡萄球菌
－
产生凝固酶
+
－
－
产生耐热DNA酶
+
－
－
产生SPA
+
－
－
新生霉素敏感性
S
S
R
致病性
强
弱
无
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金葡菌噬菌体分型
• 分型：分五个群，共22型 • 意义：追踪传染源
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抵抗力
• 是抵抗力最强的无芽孢细菌 • 耐干燥 • 对龙胆紫敏感 • 易形成耐药性：耐甲氧西林金黄色葡萄
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生物学性状
• 形态染色 • 培养特点 • 生化反应 • 抗原构造 • 分类 • 抵抗力
报告
检验方法—直接镜检
• 方法:取标本直接涂片,革兰染色后镜检 • 初步报告:
“查见革兰阳性葡萄串状排列球菌，疑 似葡萄球菌” “查见革兰阳性球菌”
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检验方法—分离培养
• 脓、痰、脑脊液标本－→接种血明溶血环（β-溶血环）
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• 血平板（营养培养基）： 中等大小、光滑型菌落、脂溶性色素色素 、透明溶血环（致病葡萄球菌）
• 高盐甘露醇平板（选择鉴别培养基）： 淡橙黄色菌落（致病葡萄球菌）
• 卵黄高盐琼脂平板（选择鉴别培养基）： 菌落周围形成白色沉淀圈（致病葡萄球菌 ）
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生化反应
• 触酶试验：+ • 葡萄糖氧化发酵试验：发酵+ • 甘露醇分解试验：+（致病菌株）
培养特性
生长条件 • 需氧、兼性厌氧 • 营养要求不高，普通培养基上生长良好 • 耐盐，10～15％NaCl上能生长
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培养特性
生长现象 • 液体培养基：均匀混浊、少许沉淀 • 固体培养基：中等大小菌落、圆形、凸
起、边缘整齐、光滑、湿润的S型菌落
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常用培养基及菌落特征
球菌
• 种类: • 革兰阳性
葡萄球菌属、链球菌属（链球菌、肺炎 链球菌）、肠球菌属、微球菌属等 • 革兰阴性 奈瑟菌属、布兰汉菌属
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形态染色
• 革兰阳性球菌、葡萄串状排列 • 无鞭毛、无芽孢、一般不形成荚膜
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葡萄球菌革兰染色镜下图
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染色性： 形态： 排列：
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凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）
• 条件致病菌 • 医院内感染的重要病原菌 • 对多种抗生素耐药
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• 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）和 耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS ）是院内感染的重要病原菌之一，MRSA 、MRCNS对多种抗生素耐药，MRSA不仅 对青霉素类、头孢菌素类等β－内酰胺类抗 菌药物耐药，同时也对四环素、红霉素、 氯霉素、克林霉素及庆大霉素等常用抗菌 药物耐药，对利褔平和磺胺的耐药率也达 30％，但通常对万古霉素敏感。MRSA、 MRCNS常常引起院内感染与播散，且难于 治疗和控制，病死率高。
球菌（MRSA）已成为医院感染最常见 的致病菌
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致病物质
• 凝固酶 • 葡萄球菌溶素 • 杀白细胞素 • 肠毒素 • 剥脱毒素 • 毒性休克综合征毒素－1
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凝固酶
• 游离凝固酶：采用试管法检测
协同因子
游离凝固酶
凝血酶
纤维蛋白原
纤维蛋白
血浆凝固
• 结合凝固酶：采用玻片法检测
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抗原构造
★葡萄球菌A蛋白（SPA） • 存在于金黄色葡萄球菌细胞壁 • 可与人和其它哺乳动物IgGFc段非特异性
结合，应用于协同凝集试验 • 抵抗吞噬细胞的吞噬 ★多糖抗原 • 具有型的特异性,有助于金葡菌感染的诊
断
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分类和分型
葡萄球菌包括32种及亚种 • 根据产生色素的不同分类 • 根据产生凝固酶与否进行分类 • 按噬菌体分型法分类
• 玻片法：检测结合型血浆凝固酶，简便 快速
生理盐水 待检细菌 新鲜兔血浆
• 试管法：检测游离型血浆凝固酶，灵敏
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协同凝集试验
金葡菌
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细胞壁
SPA
细胞质
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SPA 细胞膜
链球菌属
• 分布：自然界、人和动物肠道、健康人 鼻咽部
• 所致疾病：致病链球菌引起各种化脓性 炎症、猩红热、风湿热等疾病。
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• 有资料表明两者的耐药谱及机理都有许 多相似的地方，其传播方式是患者―― 医护人员――患者之间的传播，特别是 医护人员手的传播，这些带菌者是有可 能成为传染源，推测病房医护人员 MRSA,MRCNS带菌可能是由于长期工 作在病房，接触患者较多所致。
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鉴定试验：血浆凝固酶试验
粪便、呕吐物
增菌培养 直接涂片染色 分离培养 分离培养
分离培养
鉴定试验和药敏试验
菌落涂片染色 血浆凝固酶 耐热核酸酶 药敏试验 其它试验
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报告
金葡菌脓标本检验程序
脓标本
直接涂片染色
分离培养(血平板)
鉴定试验和药敏试验
涂片染色 血浆凝固酶 耐热核酸酶 药敏试验 其它试验
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