!"!
样品分析 不同食品中氨基酸含量的测定结果见表 3。
表 2 回归方程、 线性范围及检测限 Tabie 2 The iinear regression eguation and the iinear ranges of amino acids
氨基酸 Amino acids Asp Ser Giu Giy His Arg Thr Aia Pro Tyr Vai Met Lys Iie Leu Phe 线性回归方程 Linear regression eguation " = 34905 . 19 # + 156824 . 6 " = 44246 . 89 # + 26064 . 99 " = 33442 . 3 # + 100643 " = 56588 . 55 # - 320267 " = 52251 . 17 # + 128165 . 6 " = 83938 . 23 # + 335844 . 3 " = 56982 . 41 # + 110590 . 1 " = 39068 . 44 # + 269224 . 4 " = 45927 . 89 # + 79327 . 17 " = 60066 . 48 # - 22245 . 4 " = 52251 . 17 # + 128165 . 6 " = 61474 . 18 # - 33608 " = 83938 . 23 # + 335844 . 3 " = 56280 . 66 # + 114682 . 6 " = 56982 . 41 # + 110590 . 1 " = 63046 . 17 # - 37357 线性范围 Linear range（ moi / L） ! 10 ~ 80 10 ~ 100 10 ~ 80 10 ~ 100 10 ~ 100 10 ~ 80 10 ~ 100 10 ~ 100 10 ~ 100 10 ~ 100 10 ~ 100 10 ~ 100 10 ~ 80 10 ~ 100 10 ~ 100 10 ~ 100 相关系数 ! Correiation coefficient 0 . 9975 0 . 9996 0 . 9984 0 . 9946 0 . 9980 0 . 9980 0 . 9985 0 . 9914 0 . 9989 0 . 9997 0 . 9980 0 . 9996 0 . 9980 0 . 9986 0 . 9985 0 . 9998
摘 要 采用柱前衍生高效液相色谱法， 测定了食物中天冬氨酸、 赖氨酸、 亮氨酸等 16 种氨基酸含
量。衍生试剂为 6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯 （ AOC） ， 流动相为磷酸盐缓冲溶液、 乙腈、 水， 梯度洗脱。色谱柱为 4 ! 紫外检测。氨基酸浓度与峰面积呈良好的线性 m 的 Nova-Pak tm C18 柱， 关系， 相关系数均在 0.99 以上， 回收率在 88% ~ 110% 之间， 样品测定结果良好。 关键词 高效液相色谱法， 梯度洗脱， 柱前衍生， 氨基酸
表1 流动相梯度洗脱表
2000-04-30 接受。 ! 1999-11-05 收稿； 邮编 265600。 "" 山东省蓬莱市技术监督局，
1092 Tabie 1 Conditions of gradient separation
流速 Fiow rate（mL / min） 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
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#
#
第9期
苗
虹等： 柱前衍生高效液相色谱法测定食物中氨基酸含量
1093
图1 Fig. 1
氨基酸标准及样品的色谱图 The chromatograms of amino acids standard and food sampies
（ amino acids standard） ； （ Nestie condensed miik） 。1 . aspartate （ Asp） ， （ Ser） ； a. 氨基酸标准 b . 雀巢奶粉 2 . serine 3. （ Giu） ； （ Giy） ； （His） ； （ Arg） ； （ Thr） ； （ Aia） ； giutamate 4 . giycyne 5 . histidine 6 . NH3 ； 7 . arginine 8 . threonine 9 . aianine 10 . （ Pro ） ； （ Cys ） ； （ Tyr ） ； （ Vai ） ； （ Met ） ； （ Lys ） ； 11 . cystine 12 . tyrosine 13 . vaiine 14 . methionine 15 . iysine 16 . proiine （ Iie） ； （Leu） ； （Phe） 。 isoieucine 17 . ieucine 18 . phenyiaianine
2.4
实验部分
（AOC） 与氨基酸迅速反应生成在 248 nm 有紫外吸收的高稳定性 2.4.1 衍生反应 衍生试剂 的脲和羟基琥珀酰亚胺 （ NHS） ， 过量的试剂可在慢反应中完全水解， 过程如下：
R1 R1 HN R2 氨基酸 Amino acid + NH 0 # N NH N # R2 + 0 NHS 0 H0 N
1094
分析化学
第 28 卷
表 3 样品测定结果 Tabie 3 Determination resuits of amino acids in food sampies
氨基酸 Amino acids （mg / g） Asp Ser Giu Giy His Arg Thr Aia Pro Tyr Vai Met Lys Iie Leu Phe 氨基酸总量 Totai amio acid 维维豆奶粉 Weiwei soy miik powder 23 . 92 8 . 22 43 . 57 6 . 82 2 . 68 6 . 10 6 . 07 7 . 61 11 . 17 6 . 50 8 . 87 3 . 22 12 . 70 8 . 71 15 . 96 9 . 94 182 . 07 猪肉松 Meat powder 25 . 27 8 . 59 51 . 51 8 . 12 4 . 58 6 . 05 8 . 14 14 . 05 9 . 73 4 . 71 10 . 98 5 . 33 21 . 01 10 . 02 20 . 25 9 . 93 218 . 28 血粉 Biood powder 74 . 86 31 . 66 95 . 97 28 . 56 30 . 72 13 . 90 31 . 68 63 . 78 29 . 29 27 . 09 45 . 13 14 . 10 68 . 90 26 . 68 82 . 23 45 . 56 710 . 11 雀巢奶粉 Nestie condensed miik 7 . 12 4 . 05 20 . 91 1 . 75 1 . 64 0 . 75 2 . 86 2 . 90 8 . 25 1 . 85 5 . 17 1 . 84 7 . 30 3 . 92 8 . 57 4 . 02 82 . 92 完达山奶粉 Wandashan miik powder 16 . 94 11 . 00 50 . 73 5 . 02 3 . 61 2 . 58 6 . 91 6 . 56 20 . 48 8 . 04 12 . 76 5 . 88 17 . 03 9 . 73 20 . 52 9.8 205 . 99
"
"#!
实验部分
试剂 浓盐酸 （优级纯） ； 苯酚 （分析纯） ； 混合氨基酸标准液 （ Waters 公司） ， 含 17 种蛋白水解氨基
酸： 天冬氨酸 （Asp） 、 丝氨酸 （ Ser） 、 谷氨酸 （ GIu） 、 甘氨酸 （ GIy） 、 组氨酸 （ His） 、 精氨酸 （ Arg） 、 苏氨 酸 （ Thr） 、 丙氨酸 （AIa） 、 脯氨酸 （ Pro） 、 胱氨酸 （ Cys） 、 酪氨酸 （ Tyr） 、 缬氨酸 （ VaI） 、 蛋氨酸 （ Met） 、 赖 、 异亮氨酸 （ IIe） 、 亮氨酸 （ Leu） 、 苯丙氨酸 （ Phe） 、 除胱氨酸浓度为 1.25 mmoI / L 外， 其 氨酸 （ Lys） 余 16 种氨基酸浓度各为 2.5 mmoI / L； 流动相 A， 磷酸盐缓冲溶液 （Waters 公司） ， 按 1 1 10 用双蒸 水稀释， pH 4 . 95。亦可自行配制， pH 值应准确调节。配制方法： 19.0 g 三水醋酸钠， 1.72 g 三 乙胺溶于 1000 mL 水， 用磷酸调 pH 至 4 . 95， 加适量 EDTA， 用 0.45 ! 乙 m 滤膜过滤。流动相 B， 腈； 流动相 C， 双蒸水； 硼酸盐缓冲溶液 （Waters 公司） ； 衍生试剂 6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚 氨基甲酸酯 （AOC） （Waters 公司） ， 用时加入 1 mL 乙腈， 混匀于 55C 烘箱加热 10 min 至溶解。 仪器 "#" 高效液相色谱仪 （ Waters 公司， ； 真空泵 （ WP 600 泵， 2487 紫外检测器， PC800 工作软件） 日本） ； （昆山市超声波仪器厂） ， 15， KO-250 型超声波清洗器 XW-80 型涡旋混合器。 "#$ 色谱条件 （Waters 公司） ； 柱温， 检测波长， 进样量 色谱柱， 高效 4 ! m Nova-pak tm C18 柱 37C ； 248 nm； 梯度洗脱条件， 如表 1。 10 ! L，
! ! ! ! "
#
0 0 AOC
$
N
衍生氨基酸 Derivatized amino acid