葡萄糖 2.5g 卵磷脂 1g 吐温80 7g 蒸馏水 1000mL ❖ 制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其它成分混合，加
热溶解，调pH为.2～7.3 分装，103.43kPa（121℃ 15 lb）20min 高 压灭菌。注意振荡，使沉淀于底层的吐温80 充分混合，冷却至25℃左 右使用。 ❖ 注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。 ❖ 灭菌液体石蜡。 ❖ 灭菌吐温80。
微生物检验方法
一、总则 二、菌落总数 三、粪大肠菌群 四、霉菌和酵母菌
一、总则
1.范围 本规范规定了化妆品微生物学检验
的基本要求。 本规范适用于化妆品样品的采集、
保存及供检样品制备。
2.仪器和设备 天平 高压灭菌器 振荡器 三角瓶(250mL) 玻璃珠 玻璃棒 刻度吸管 (1 mL、10mL) 研钵或均质器恒 温水浴箱
固体样品
称取10g，加到90mL 灭菌生理盐水中，充分振荡混匀， 使其分散混悬，静置后，取上清液作为1：10 的检液。 如有均质器，上述水溶性膏、霜、粉剂等，可称10g 样 品加入90mL•灭菌生理盐水，均质1min～2min；疏水性 膏、霜及眉笔、口红等，称10g 样品，加10mL•灭菌液 体石蜡，10mL 吐温80，70mL 灭菌生理盐水，均质 3min～5min。
3 仪器和设备
三角瓶，250mL。 量筒，200mL。 pH 计或精密pH 试纸。 高压灭菌器。 试管：15×150mm。 灭菌平皿：直径9cm。 灭菌刻度吸管，10mL、1mL。 酒精灯。 恒温培养箱：36℃±1℃。 放大镜。
4 培养基和试剂
生理盐水
卵磷脂、吐温80—营养琼脂培养基
成分：蛋白胨 20g、牛肉膏 3g 、氯化钠 5g 、琼脂 15g、 卵磷脂1g、 吐温80 7g、 蒸馏水 1000mL
3.培养基和试剂
❖ 生理盐水(成分：氯化钠 8.5g) 蒸馏水加至1000mL,溶解后，分装到加 玻璃珠的三角瓶内，每瓶90mL，103.43kPa（121℃ 15 lb）20min高 压灭菌。
❖ SCDLP 液体培养基 ❖ 成分：酪蛋白胨 17g 大豆蛋白胨 3g 氯化钠 5g 磷酸氢二钾 2.5g
(1) 用灭菌吸管吸取1：10 稀释的 检液2mL，分别注入到两个灭菌 平皿内，每皿1mL。另取1mL 注 入到9mL 灭菌生理盐水试管中 （注意勿使吸管接触液面），更 换一支吸管，并充分混匀，制成1： 100 检液。吸取2mL，分别注入 到两个灭菌平皿内，每皿1mL。 如样品含菌量高，还可再稀释成1： 1000 1:10000，……等，每种稀 释度应换1 支吸管。 (3) 为便于区别化妆品中的 颗粒与菌落，可在每100mL 卵磷脂吐温80 营养琼脂中 加入1mL 0.5％的TTC 溶液，如有细 菌存在，培养后菌落呈红色， 而化妆品的颗粒颜色无变化。
5 供检样品的制备
液体样品
水溶性的液体样品，可量取10mL 加到90mL 灭菌生理盐水中，如样品少于 10mL，仍按10 倍稀释法进行。如为5mL 则加到45mL 灭菌生理盐水， 混匀后，制成1：10 检液。
油性液体样品，取样品10mL，先加5mL 灭菌液体石蜡混匀，再加10mL•灭 菌的吐温80，在40℃～44℃水浴中振荡混合10min，加入灭菌的生理盐 水75mL（在40℃～44℃水浴中预温），在40℃～44℃水浴中乳化，制成 1：10 的悬液。
二、菌落总数
1 范围
本规范规定了化妆品中菌落总数的检验方法。 本规范适用于化妆品菌落总数的测定。
2 定义
菌落总数（Aerobic bacterial count）是指 化妆品检样经过处理，在一定条件下培养后 （如培养基成分、培养温度、培养时间、pH 值、需氧性质等），1g（1mL）检样中所含 菌落的总数。所得结果只包括一群本方法规 定的条件下生长的嗜中温的需氧性菌落总数。 测定菌落总数便于判明样品被细菌污染的程 度，是对样品进行卫生学总评价的综合依据。
5 操作步骤
(2) 将融化并冷至45℃～50℃的卵磷脂吐温 80 营养琼脂培养基倾注到平皿内，每皿约 15mL，随即转动平皿，使样品与培养基充 分混合均匀，待琼脂凝固后，翻转平皿，置 36℃±1℃培养箱内培养48h±2h。另取一 个不加样品的灭菌空平皿，加入约15mL 卵 磷脂吐温80 营养琼脂培养基，待琼脂凝 固后，翻转平皿，置36℃±1℃培养箱内培 养48h±2h，为空白对照。
4 样品的采集及注意事项
➢ 所采集的样品，应具有代表性。 ➢ 供检验样品，应严格保持原有的包装状态。 ➢ 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。
若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜 先取出部分样品做细菌检验，再将剩余样品做其它分析。 ➢ 在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物 的再污染和扩散， ➢ 所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相 应条件下，按无菌操作规定进行。 ➢ 如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出之日起该菌种及被检 样品应保存一个月。
制法：先将卵磷脂加到少量蒸馏水中，加热溶解，加入吐 温80，将其他成分（除琼脂外）加到其余的蒸馏水中， 溶解。加入已溶解的卵磷脂、 吐温80，混匀，调pH 值 为7.1～7.4，加入琼脂，103.43kPa（121℃ 15 lb） 20min 高压灭菌，储存于冷暗处备用。
0.5％氯化三苯四氮唑
成分：TTC 0.5g 蒸馏水 100mL溶解后过滤，103.43kPa （121℃ 15 lb）20min 高压灭菌，装于棕色试剂瓶，置 4℃冰箱备用。
膏、霜、乳剂半固体状样品 亲水性的样品：
称取10g，加到装有玻璃珠及90mL•灭菌生理盐水 的三角瓶中，充分振荡混匀，静置15min。用其上 清液作为1:10 的检液。
疏水性样品：称取10g，放到灭菌的研钵中，加
10mL 灭菌液体石蜡，研磨成粘稠状，再加入 10mL 灭菌吐温80，研磨待溶解后，加70mL 灭菌 生理盐水，在40℃～44℃水浴中充分混合，制成1： 10 检液。