干燥
固定
3、油镜观察
五、实验结果：
结核杆菌呈红色，常堆积成团，排列无
序，偶呈分枝状生长。
背景及非抗酸性细菌呈兰色。
六、注意事项：
1、无菌操作
2、涂片厚度要适中 3、固定 4、冲洗 5、染色时间 6、初染加热的温度，勿沸腾
准备
细菌：卡介苗 染液：抗酸染液（2套/室） 其它：载玻片（1张/人）、结核分枝杆菌示 教片（1张/人） 痰标本 8盒
实验九 抗酸染色
临床病原生物学教研室
一、实验目的：
1.掌握抗酸染色的原理和方法
2掌握结核分支杆菌痰涂片的报告枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质，主要是分 枝菌酸，它包围在肽聚糖的外面，所以分枝杆菌 一般不易着色，要经过加热和延长染色时间来促 使其着色。但分枝杆菌中的分枝菌酸与染料结合 后，就很难被酸性脱色剂脱色，故名抗酸染色。 齐-尼氏抗酸染色法是在加热条件下使分枝菌酸与 石炭酸复红牢固结合成复合物，用盐酸酒精处理 也不脱色。当再加碱性美兰复染后，分枝杆菌仍 然为红色，而其他细菌及背景中的物质为兰色。

三、实验材料：
细菌：结核杆菌
染液：石炭酸复红液、3%盐酸酒精、碱性美
兰溶液
其它：接种环、酒精灯、载玻片等
四、实验方法：
1、细菌涂片的制备
1）涂片：20mm*25mm薄涂片或
20mm*15mm厚涂片 2）干燥：自然干燥 3）固定：火焰固定
四、实验方法：
1、细菌涂片标本的制备 涂片 2、染 色
1）初染：用玻片夹夹持涂片标本，滴加石炭酸复红 2-3滴，在火焰高处徐徐加热，切勿沸腾，出现蒸汽 即暂时离开，若染液蒸发减少，应再加染液，以免 干涸，加热5-10分钟，待标本冷却后用水冲洗。 2）脱色： 3%盐酸酒精脱色30’’~1’；用水冲洗。 3）复染：用碱性美兰溶液复染1’，用水冲洗后用吸 水纸吸干。