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碱性蛋白与酸性蛋白的显示


1取一滴血滴于玻片的一端 2以另一玻片以30-45度的角度匀速向前推片,中间不 要停顿,不可反复涂片,动作要快以防止血液凝固。 3自然干燥后固定。
方法与步骤
1.新鲜血涂片自然干燥10min,入70%乙醇溶液中 固定10min。 2.取 出 晾 干 入7 0 - 9 0 ℃ 5 % 三 氯 醋酸 溶 液1 5 - 20min。 3.在冷5%三氯醋酸溶液漂洗后,蒸馏水洗3次 (每次5min)。 4.分别插入染色液中染色(酸性蛋白染色液染色 15min,碱性蛋白染色液染色45min) 5.取出,蒸馏水洗。 6.风干,二甲苯透明2min,树胶封片。
观察结果
酸性蛋白染色时,蟾蜍红细胞质内 遍布绿色,细胞核内绿色稀少。 碱性蛋白染色时,蟾蜍红细胞核为 绿色。
酸性蛋白与碱性蛋白的分布 有何区别?
显示细胞核内酸性蛋白 显示细胞内酸性蛋白
显 示 细 胞 核 内 碱 性 蛋 白

蟾蜍取血
常用捣髓法处死蟾蜍,即用解剖针捣毁其脑组 织和脊髓。具体方法是,左手握住蟾蜍的身体 和四肢,使其腹部贴着掌心,食指压住蟾蜍头 部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及 一凹陷(即枕骨大孔所在处),右手持解剖针直 l 2mm 插入此凹陷约l~2mm,随即将针尖转向头侧 插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转 向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其 四肢松软,呼吸消失为止。 以破坏脊髓法处死蟾蜍,将其腹面向上放人蜡 盘中,剪开胸腔,打开心包。小心将心脏剪一 小口,取心脏血一滴滴在干净载玻片一端,推 片,按此法制备二张血涂片,室温晾干。
碱性蛋白与酸性蛋白 的显示
目的要求
1.学会制血涂片 2.了解碱性蛋白与酸性蛋白的显示方法的 原理及操作步骤 3.了解碱性蛋白与酸性蛋白的分布
实验原理
以酸性氨基酸成分为主的蛋白质为酸性 蛋白;以碱性氨基酸成分为主的蛋白质为 碱性蛋白。细胞核内有组蛋白(碱性蛋 白)及少量酸性蛋白,细胞质中主要有 酸性蛋白,标本经三氯醋酸处理抽提掉 核酸后,用不同pH值的快绿染液分别染 色,使细胞内的酸性蛋白和碱性蛋白质 显示出来。
实验用品
1.器材:水浴锅,染色缸,载玻片,注射器等 器材:水浴锅,染色缸,载玻片, 器材 2.试剂:①70%乙醇溶液 ②5%三氯醋酸溶液 ③ 试剂: 70% 试剂 005%Na2CO3 0.2%快绿 ④0.005%Na2CO3溶液 75mol/L HCL: 盐酸0 109ml 比重1 19) ml( ⑤1.75mol/L HCL: 盐酸0.109ml(比重1.19)加蒸 馏水至100ml(若盐酸比重1 16则取 13ml 100ml 则取0 ml) 馏水至100ml(若盐酸比重1.16则取0.13ml) 酸性蛋白染色液( pH2 ⑥ 酸性蛋白染色液 ( pH2.2):0.2% 快绿和等量 75mol/L HCL溶液混合而成 1.75mol/L HCL溶液混合而成 碱性蛋白染色液( pH8 ⑦ 碱性蛋白染色液 ( pH8.0):0.2% 快绿和等量 005%Na2CO3溶液混合而成。 0.005%Na2CO3溶液混合而成。 3.材料:蟾蜍血涂片。 材料: 材料 蟾蜍血涂片。
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