1.用前检查：
零件是否齐全，镜头是否清洁。
2.调节光亮度
3.低倍镜观察：粗调、细调
4.依次再进行中倍、高倍观察
5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象
后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴
香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，
细调至看清物象为止。
6.换片：另换新片，必须从第三条开始
操作。
7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，
先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再
用擦镜纸沾取少量洗液（无水乙醇∶
无水乙醚＝７∶３）擦去残留的
油，最后用擦镜纸擦去残留的洗液，
后将镜体全部复原。
显微镜保养和使用中的注意事项：
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。
2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或
粗布，以保证光洁度3.观察标本时，必须依次用低、中、高
2.油镜的使用
油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。
加入中间的介质是一层香柏油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。
3.单染色法
是用一种染料使细菌着色以显示其形态，不能辨别细菌细胞的构造，通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红等）使其着色。
片滋生霉菌而腐蚀镜片。
（二）、单染色的方法：
染色的流程图：
涂片干燥固定染色
水洗晾干镜检
1.先将载玻片洗净，擦干。
2.涂片：取干净载玻片一块，在载玻片中央加一滴蒸馏水，按无菌操作法取大肠杆菌涂片，做成浓菌液，注意取菌不要太多。
3.晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。
4.固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。
3
11
25
29
九
大分子物质的水解试验
3
12
40
十
糖发酵试验
3
13
41
十一
IMVic试验
3
14
42
十二
实验课综合技姓名
课堂提问
（10分）
平时操作
（10分）
实验报告
（30分）
期终考试
（50分）
总分
（1000分）
级班20年月日
显微镜的使用
细菌的单染色
实验一
一、实验目的与要求:
微生物学实验
兰州大学生命科学学院
微生物研究所
一.显微镜的使用细菌的单染色
二.革兰氏染色法
三.细菌的芽孢染色法
四.酵母菌形态观察及死活鉴定微生物显微镜
直接计数法
五.培养基的配制及干、湿热灭菌法
六.微生物的分离与纯化
七.微生物培养特征的观察
八.微生物平板菌落计数法
九.大分子物质的水解试验
十.糖发酵试验
十一. IMViC试验
2.固定时不能在火上烤的时间太长，否则菌体收缩变形
3.染色后必须晾干后才能用油镜镜检
染色中注意事项：
五、示教：
1.油镜的使用
2.无菌操作
3.涂片染色
六、实验结果：
绘制所观察到的细菌形态
七、思考题：
1.用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间滴加什么油？起什么作用？
2.试列表比较低背景、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作？
十二.实验综合技能测试
微生物学实验卡
次
序
实验内容
学时
周次
教材实验
老师签字
一
预备实验
3
2
二
显微镜的使用
和细菌单染色
3
3
2
5
三
革兰氏染色
3
6
6
四
细菌的
芽孢染色
3
7
7
五
酵母菌的形态
观察及死活细
胞鉴别和显微
直接计数
3
8
12
28
六
培养基配制及
干湿热灭菌
3
9
16
20
21
注意事项：1.本实验课选用统编教材15个实验内容，学时共计36学时。
倍镜，最后用油镜。当目视接目镜
时，特别在使用油镜时，切不可使用
粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。
4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够
轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，
并且能够在左眼观察时，右眼注视
绘图。
5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左
手托镜座，不可单手拿，更不可倾
斜拿。
6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜
1.学习并掌握油镜的使用方法
2.学习并掌握对细菌进行进行涂片
染色的技术
3.学习无菌操作技术
二、实验原理
1.显微镜的结构
普通光学显微镜的构造可分为两大部分：一为机械装置，一为光学系统，这两部分很好的配合，才能发挥显微镜的作用。
光学显微镜的构造
1.物镜转换器2.接物镜3.游标卡尺4.载物台5.聚光器6.彩虹光阑7.光源8.镜座9.电源开关10.光源滑动变阻器11.粗调螺旋12.微调螺旋13.镜臂14.镜筒15.目镜16.标本移动螺旋
5.染色：将固定过的涂片放在废液缸上的
搁架上，加复红染色1-2min。
6.水洗：用水洗去涂片上的染色液。
7.干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。
8.镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。
1.涂片不可太厚
3.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？
革兰氏染色法
实验二
一、实验目的与要求:
1、了解革兰氏染色法的原理及其
在细菌分类鉴定中的重要性
2、学习并掌握革兰氏染色法
二、实验原理：
革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。
当在中性、弱碱性、弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷。而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着色。
三、材料仪器
1.仪器：显微镜、酒精灯等
2.实验材料：
菌种：枯草芽孢杆菌
四联球菌
染色剂：齐氏石碳酸复红染液
碱性美兰染液
四、内容及方法
（一）、显微镜的使用（主要是油镜）
G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经复红复染后就成红色。
G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
2.本卡为便于学生预习，搞好平时考核而设计，所以学生必须妥善保存，学期
结束交回，以作实验平时的考核参考。
3.学生每次上课时必须随身携带本卡，试验每次结束后，老师签字后方能离开
实验室，无老师签字，本次实验以缺席论处。
次
序
实验内容
学时
周次
教材实验
老师签字
七
微生物的分离
与纯化（一）
3
10
24
八
微生物的分离与纯化（二）