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实验大肠杆菌基因组DNA的提取

大肠杆菌基因组DNA的提取
1.吸1ml大肠杆菌DH5α至1.5 ml离心管中,10000rpm离心30秒;
2.吸干上清液,菌体充分悬浮于0.5 ml裂解液(10 mM Tris, 100 mM NaCl, 10 mM EDTA, 0.5% SDS, pH8.0);
3.加12.5 μl 10 mg/ml proteinase K, 混匀,37℃水浴1小时;4.加250 μl 6 M NaCl, 剧烈振荡30秒;
5.冰浴10 min后9500rpm离心10min;
6.转移500 μl上清至1.5 ml离心管中,加1 ml无水乙醇,颠倒混匀直至看清沉淀;
7.10000rpm离心5min, 吸干上清,沉淀溶于300μl水中;8.加15μl 2 mg/ml RNaseA, 混匀,37℃水浴1小时;9.加150μl饱和酚及150μl氯仿,振荡10秒后10000rpm 离心1 min;
10.上清转移到1.5 ml离心管中,加2.5倍体积无水乙醇,混匀;11.10000rpm离心2min, 吸干上清,沉淀用0.5 ml 70%乙醇洗涤一次,吸干乙醇,室温晾干(~10 min);
12.沉淀溶于300μl水中,取10μl电泳观察,其余置-20℃冻存备用。

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