万方数据
生堡医堂苤查！！！！生！旦！！旦筮！！鲞筮！！塑盟！！！丛鲤』堡！ｉ塑，丛型！！：！！！垒：ｙ！！：！堡：盟！：！§
ｉｎ ＢＴＫ ｇｅｎｅ ｍａｙ ｂｅ ｔｈｅ ｐｏｓｓｉｂｌｙ ｔｈｅ
ｃａｕｓｅ
ｍａｊｏｒ ｃａｕｓｅｓ ｏｆ ｐｅｄｉｇｒｅｅｓ ２ ａｎｄ ３ ｗｉｔｈ ＸＬＡ．Ｔｈｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｐ．Ｌ３７３Ｉ ｏｆ ＢＴＫ ｇｅｎｅ ｉｓ ｏｆ ｐｅｄｉｇｒｅｅ １ ｗｉｔｈ ＸＬＡ，ｂｕｔ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｖｅｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｉｓ ｎｅｅｄｅｄ．Ｆｏｒ ｐｅｄｉｇｒｅｅ ｏｆ ＸＬＡ，
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】
（ＢＴＫ）ｇｅｎｅ （ＰＣＲ）ｗａｓ
ｐａｔｉｅｎｔｓ ｉｎ
ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ
Ｔｏ
ｅｖａｌｕａｔｅ ｔｈｅ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ ｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｂｒｕｔｏｎ’ｓ ｔｙｒｏｓｉｎｅ
ｋｉｎａｓｅ
ｔｈｒｅｅ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｗｉｔｈ Ｘ—ｌｉｎｋｅｄ
ａｇａｍｍａｇｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ（ＸＬＡ）ｂｉｒｔｈ
Ｐｒｅｎａｔａｌ Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，Ｆｉｒｓｔ Ｋｉｎｇｍｅｄ Ｃｅｎｔｅｒ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｇｚｈｏｕ ４５００５２，Ｃｈｉｎａ；’Ｇｎａｎｇｚｈｏｕ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０３３０，Ｃｈｉｎａ Ｍｏ Ｇｕｉｌｉｎｇ ａｎｄ‰昭Ｘｉａｎｇｄｏｎｇ ａｒｅ ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ａｕｔｈｏｒｓ ｗｈｏ ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｄ ｅｑｕａｌｌｙ ｔｏ ｔｈｅ ａｒｔｉｃｌｅ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ：‰凡ｇ Ｘｉａｎｇｄｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｋｏｎｇｘｄ＠２６３．ｎｅｔ
Ａ ｍｉｓｓｅｎｓｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｅ．１１１７Ｃ＞Ａ（Ｐ．Ｌ３７３Ｉ）ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ｐｅｄｉｇｒｅｅ １．Ｔｈｅ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｗａｓ ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｄａｍａｇｅ ｂｙ ｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇ ｉｎ ｓｉｌｌｉｃｏ．Ａ
ｎｏｎｓｅｎｓｅ
ｍｕｔａｔｉｏｎ
ｅ．１２６Ｔ＞Ｇ（Ｐ．Ｙ４２Ｘ）ｗａｓ ｆｏｕｎｄ
ｉｎ
ｐｅｄｉｇｒｅｅ ２．Ａ ｓｉｎｇｌｅ ｂａｓｅ
ｄｅｌｅｔｉｏｎ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｅ．１ ６７９ｄｅｌＣ（Ｐ．Ｐ５６０ｆｓＸｌ ０）ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｉｎ ｐｅｄｉｇｒｅｅ ３．Ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ，Ｐ．Ｌ３７３ Ｉ，Ｐ． Ｙ４２Ｘ ａｎｄ Ｐ．Ｐ５６０ｆｓＸｌ０ ｗｅｒｅ ｎｏｖｅｌ．Ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ ｎｏｖｅｌ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｗｅｒｅ ａｂｓｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ １００ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌｓ．Ｔｈｅ
ａｎｄ ｅｘｏｎ—ｉｎｔｒｏｎ ｂｏｕｎｄａｒｉｅｓ ｏｆ ＢＴＫ ｇｅｎｅ ｉｎ ３ ｕｎｒｅｌａｔｅｄ
ｗｅｒｅ
ｏｆ ＸＬＡ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｍｏｔｈｅｒｓ ｆｒｏｍ Ｊａｎｕａｒｙ ２０１ １ ｔｏ Ｊｕｎｅ ２０１２．Ｔｈｅ ＰＣＲ ｐｒｏｄｕｃｔｓ
ｆｕｒｔｈｅｒ ａｎａｌｙｚｅｄ
ｂｙ ｄｉｒｅｃｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ．Ｐｒｅｎａｔａｌ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ Ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｂｙ ｃｈｏｒｉｏｎｉｃ ｖｉｌｌｕｓ ｓａｍｐｌｉｎｇ ａｆｔｅｒ ｇｅｎｏｔｙｐｉｎｇ ｏｆ ｍｏｔｈｅｒｓ ｏｆ ｐｒｏｂａｎｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｒｅｅ ｎｏｖｅｌ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｏｆ ＢＴＫ ｇｅｎｅ ｗｅｒｅ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｉｎ ３ ｐｅｄｉｇｒｅｅｓ ｏｆ ＸＬＡ．
ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｘ—ｌｉｎｋｅｄ；Ｍｕｔａｔｉｏｎ；Ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ；
ｄｉｒｅｃｔ ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ ｏｆ ＢＴＫ ｇｅｎｅ ｉｓ ａｖａｉｌａｂｌｅ ｆｏｒ ｐｒｏｖｉｄｉｎｇ ｇｅｎｅｔｉｃ ｃｏｕｎｓｅｌｉｎｇ，ｐｒｅｎａｔａｌ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ．
【Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ】Ａｇａｍｍａｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ；Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｇｅｎｅｓ，ＢＴＫ
ｘ一连锁无丙种球蛋白血症（ｘＬＡ）是由Ｂｒｕｔｏｎ… 最早发现的原发性体液免疫缺陷病，故又称为 Ｂｒｕｔｏｎ病，是最早发现的人类原发性免疫缺陷病，该 病发病率约为１／２０ ０００万嵋ｏ。ｘＬＡ的病因是Ｂ细 胞Ｂｒｕｔｏｎ酪氨酸激酶（ＢＴＫ）缺陷，导致原始Ｂ淋巴 细胞向前Ｂ淋巴细胞的分化受阻，使成熟Ｂ淋巴细 胞的寿命缩短，外周血缺乏Ｂ淋巴细胞和浆细胞导 致各类免疫球蛋白合成不足，对很多抗原不能产生 特异性抗体反应，机体发生免疫缺陷旧ｊ。对反复感 染的患儿除进行体液和细胞免疫方面的检测外， ＢＴＫ基因突变分析已成为ｘＬＡ早期诊断、鉴别诊断 的重要手段之一。本研究通过对３个有ＸＬＡ患儿 生育史的家系行基因诊断以明确病因，并对２个家
ｍａｌｅ ｆｅｔｕｓ ｉｎ ｐｅｄｉｇｒｅｅ ３ ｗａｓ ｆｒｅｅ ｏｆ ｍｕｔａｔｉｏｎｓ ｉｄｅｎｔｉｃａｌ
ａ
ＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．０３７６－２４９１．２０１４．１８．０１３ 作者单位：４５００５２郑州大学第一附属医院产前诊断中心（孔祥东、刘宁），儿科（田培超）；５１０３３０广州金域医 学检验中心分子遗传室（莫桂玲、陈敏芳） 莫桂玲与孔祥东对本文有同等贡献，并列为第一作者 通信作者：孑Ｌ祥东，Ｅｍａｉｌ：ｋｏｎｇｘｄ＠２６３．ｎｅｔ
方法收集２０１１年１月至２０１２年６月在郑州大学第一附属医院就诊的３个ＸＬＡ家系成员的外周血 标本，应用ＰＣＲ扩增和直接测序方法对３例ＸＬＡ患者进行Ｂｒｕｔｏｎ酪氨酸激酶（ＢＴＫ）基因测序，分析 ＢＴＫ基因外显子区和剪切区ＤＮＡ序列改变情况，采用ＰＲＯＶＥＮ、ＰｏｌｙＰｈｅｎ一２和ＣｌｕｓｔａｌＯ软件对新发现 的错义突变进行功能预测。在确定每个家系基因型后，对家系２和家系３中的２个高危胎儿抽取绒 毛进行产前诊断。结果家系１中，先证者及其母亲携带ＢＴＫ基因Ｃ．１１１７Ｃ＞Ａ（Ｐ．Ｌ３７３Ｉ）错义突变， 采用功能预测软件分析为致病突变的可能性大；家系２中，先证者及其母亲携带ＢＴＫ基因Ｃ．１２６Ｔ＞Ｇ （Ｐ．Ｙ４２Ｘ）无义突变；家系３中，先证者及其母亲携带ｅ．１６７９ｄｅｌＣ（Ｐ．Ｐ５６０ｆｓＸｌ０）缺失突变。３个ＸＬＡ 家系发现的３种ＢＴＫ基因突变为新突变，１００名健康个体ＢＴＫ基因相应区域测序，未发现有上述同 样序列改变。对明确致病突变的家系２和家系３胎儿行孕早期产前诊断，家系２胎儿为Ｐ．Ｙ４２Ｘ女 性杂合突变携带者，家系３胎儿为男性未携带突变基因者，２对夫妇均选择继续妊娠，胎儿娩出后随 访结果与产前诊断结果一致。结论发现３个ＢＴＫ基因新变异，ＢＴＫ基因Ｐ．Ｙ４２Ｘ和Ｐ．Ｐ５６０ｆｓＸｌ０ 突变是家系２和家系３患者的致病原因，ＢＴＫ基因Ｐ．Ｌ３７３Ｉ突变可能是家系１患者致病的主要原因， 但需要功能验证。对于有ＸＬＡ生育史的夫妇再次生育时，应用基因测序技术行产前ＢＴＫ基因突变 分析可以有效地预防患儿出生。
ｅｘｏｎ
ｈｉｓｔｏｒｙ，ｍｕｔａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ
ｐｒｅｎａｔａｌ ｇｅｎｅｔｉｃ ｄｉａｇｎｏｓｉｓ ｏｆ ＢＴＫ ｇｅｎｅ ｆｏｒ ｔｗｏ ｆａｍｉｌｉｅｓ ｗｉｔｈ ＸＬＡ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｐｐｌｉｅｄ
ｔｏ
ａｍｐｌｉｆｙ ｔｈｅ ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ
ｃｏｍ／ｈｇｍｄ／ｐｒｏ／ｓｔａｒｔ．ｐｈｐ）及ＢＴＫ基因数据库（ｗｗｗ．
ｕｔａ．Ｆｒ／ｉｍｔ／ｂｉｏｉｎｆｏ／ＢＴＫｂａｓｅ）来初步确定为新发现的 序列变异，新突变均通过１００名健康无关个体相应 外显子测序以排除为多态性位点。新突变的命名参 照国际基因变异命名体制ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｇｖｓ．ｏｒｓ／ ｍｕｔｎｏｍｅｎ提供的命名法来命名。
１
１周时提取胎儿绒毛标本ＤＮＡ并使用ＤＮＡ测序
ＰｏｗｅｒＰｌｅｘ １６
方法对胎儿基因组ＤＮＡ进行针对性突变分析。选
用Ｐｒｏｍｅｇａ ＨＳ系统ＡＭＥ位点进行性 别鉴定，按照Ｐｒｏｍｅｇａ
ＰｏｗｅｒＰｌｅｘ
１６ＨＳ试剂盒说明
［口］—ｏ
。山
一１
。ｆ１。ｍ
家系２Ｉ口］Leabharlann ｏＩＤ邗家系３
２
进行ＰＣＲ扩增，然后在ＡＢｌ３１３０ｘｌ测序仪上进行产 物检测，Ｇｅｎｅ．Ｍａｐｐｅｒ ＩＤ ｖ３．２软件分析结果，男性 个体ＡＭＥ位点显示为１０２和１０６ ｂｐ两种片段，女 性个体显示为１０２ ｂｐ一种片段。排除母体污染标 准：胎儿各位点等位基因荧光峰分别来自父母，胎儿 各位点无来自母亲的第２个荧光检测峰。
５．错义突变功能预测：采用ＰＲＯＶＥＡＮ软件预
１．家系：３个有ＸＬＡ患儿生育史的家系来自 ２０１１年１月至２０１２年６月郑州大学第一附属医院 儿科和消化内科。３个家系中３例先证者（图１）均 为男性，就诊年龄分别为８、１４、２岁，均无家族史，临 床拟诊为ｘＬＡ，主要就诊原因均为低水平ＩｇＧ、ＩｇＡ、 ＩｇＭ，淋巴细胞分型ＣＤｌ９无或低于２％。临床拟诊 ｘＬＡ主要参照全国免疫缺陷病登记方法Ｈ ｏ：（１）男 性；（２）反复较严重细菌感染（呼吸道、胃肠道、皮肤 以及其他深部感染），抗生素治疗效果不佳；（３）伴 有或不伴有自身免疫性疾病；（４）伴有或不伴有母 系家族中有类似疾病表现的男性患者。本研究经郑 州大学第一附属医院医学伦理委员会批准，所有基 因诊断工作均取得患者及家属的同意并签署知情同
主堡匿堂苤查！！！！生ｉ旦！！旦筮丝鲞筮！！塑堕型！丛塑』堡蔓塑：坠！！！！：垫！兰：∑！！：丝：塑！：！！
１４０５
．临床研究．
Ｘ一连锁无丙种球蛋白血症家系ＢＴＫ基因
突变分析及产前诊断研究
孔祥东 莫桂玲刘宁 田培超 陈敏芳
【摘要】
目的对ｘ一连锁无丙种球蛋白血症（ＸＬＡ）家系进行致病基因突变分析及产前诊断。
意书。
家系ｌ
测突变的意义，预测风险阈值（ｃｕｔ ｏｆｆ）＝一２．５， ≤一２．５为有害突变，＞一２．５为中性突变，同时采
用ＰｏｌｙＰｈｅｎ－２软件预测错义突变功能，采用Ｃｌｕｓｔａｌ