Studies on chemical constituents from Duchesnea indica (Andr.) FockeZHANG Lan-Tian1*,DUAN Hong-Quan2, LU Xin-Hua1, ZHENG Zhi-Hui1, ZHANGHua1, HE Jian-Gong1(1.North China Pharmaceutical Group New Drug Research and Development Co., Ltd，Hebei ，Shijiazhuang050015,China; 2. Basic Medical Research Center, School of Pharmaceutical Sciences，Tianjin MedicalUniversity，Tianjin 300070，China)[Abstract] Objective:To study the chemical constituents of Duchesnea indica (Andr.) Focke. Methods: Chemical constituents were isolated by repeated column chromatography (silica gel, Toyopearl HW-40C and preparative HPLC). The structures were elucidated on the basis of spectral data analysis. Results:ten compouds were isolated and their structures were identified as follow：2α-3α-dihydroxyurs-12,18-en-27-oic acid（1），2α-3α-dihydroxyurs-12,19-en-27-oic acid（2）, Corosolic acid（3）, Ursolic acid（4）, Pomolic acid acetate（5）, Pomolic acid（6）, Euscaphic acid)（7）, Doianoterpene D（8）, 4-hydroxy-trans-cinnacic acid（9）, 3-hydroxy-4-methoxy-trans-cinnacic acid（10）.Conclusion: compound 1，2，5，6，8～10 were first isolated from Duchesnea indica (Andr.) Focke.[Key words]Duchesnea indica (Andr.) Focke; triterpene蛇莓化学成分的研究张兰天1*，段宏泉2，路新华1，郑智慧1，张华1，贺建功1(1.华北制药集团新药研究开发有限责任公司河北石家庄050015；2. 天津医科大学基础医学研究中心药学院，天津300070)[通信作者] *张兰天，Tel：（0311）85992995，E-mail：zlt_m@作者简介：张兰天，（1977- ），女，河北沧州人，博士，从事天然药物的研究。
[摘要] 目的：研究蛇莓Duchesnea indica (Andr.) Focke.中的化学成分。
方法：采用硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、反相HPLC制备色谱等多种方法分离纯化得到化合物，采用波谱方法鉴定化合物的结构。
结果：从蛇莓中分离得到10个化合物，2α-3α-dihydroxyurs-12,18-en-27-oic acid（1），2α-3α-dihydroxyurs-12,19-en-27-oic acid（2），2α-羟基乌苏酸(Corosolic acid)（3），乌苏酸(Ursolic acid)（4），3-O-乙酰坡模醇(Pomolic acid acetate) （5），坡模酸(Pomolic acid)（6），蔷薇酸(Euscaphic acid)（7），Doianoterpene D （8），4-hydroxy-trans-cinnacic acid（9），3-hydroxy-4-methoxy-trans-cinnacic acid（10）。
结论：化合物1，2，5，6，8～10为首次从该植物中分离得到。
[关键词] 蛇莓；乌苏烷三萜蛇莓为蔷薇科龙吐珠属多年生草本植物，又名蛇泡草，蛇果藤等，分布于辽宁，湖北，湖南，广东，广西等地[1]。
中药蛇莓Duchesnea indica (Andr.) Focke.为蛇莓的全草，具有清热、凉血、消肿、解毒的功效，民间多用于治疗热病、咳嗽、痢疾、惊痫、湿疹等[1]。
近年的文献研究表明，蛇莓全草中有三萜、黄酮、香豆素、甾醇等化学成分，另外药理研究表明，蛇莓具有抗癌、抑菌、增强免疫的效果，对心血管、平滑肌、中枢神经系统、内分泌也有一定的作用[2-12]。
鉴于蛇莓中的化学成分未见系统报道，且资源丰富、具有较高的药用价值，本文采用一系列现代的提取分离技术，得到10个化合物，通过各种有机波谱解析鉴定了其化学结构，分别为2α-3α-dihydroxyurs-12,18-en-27-oic acid（1），2α-3α-dihydroxyurs-12,19-en-27-oic acid（2），2α-羟基乌苏酸(Corosolic acid) （3），乌苏酸(Ursolic acid)（4），3-O-乙酰坡模醇(Pomolic acid acetate)（5），坡模酸(Pomolic acid) （6），蔷薇酸(Euscaphic acid)（7），Doianoterpene D（8），4-hydroxy-trans-cinnacic acid（9），3-hydroxy-4-methoxy-trans-cinnacic acid（10），其中化合物1，2，5，6，8～10为首次从该植物中分离得到。
1 仪器、试剂及药材核磁共振仪: Bruker A V ANCE 300 instrument(TMS内标)；质谱仪：日本电子JEOL JMS-SX102A；制备高效液相色谱仪:PU-2089 (泵), RI-2031 和UV-2075(检测器) (日本分光公司(JASCO))；制备HPLC色谱柱:YMC-Pack ODS-A SH-343-5 (20 mm X 250 mm,YMC)。
凝胶色谱柱：Toyopearl HW-40C (Tosoh)；柱色谱和薄层色谱用硅胶均系青岛海洋化工厂生产，所用试剂均为分药材采自湖北(2004年12月)，由中南民族大学生命科学学院万定荣教授鉴定，标本(D2*******)存放于天津医科大学药学院。
2提取分离取自然干燥的蛇莓全草4.5 kg，粉碎后用95 %的乙醇加热回流提取3次，每次6 h。
提取液减压浓缩，得浸膏870g，浸膏加水混悬后，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，得乙酸乙酯提取物109 g。
乙酸乙酯提取物经反复硅胶柱色谱、凝胶渗透色谱分离，制备高压液相色谱纯化得到化合物8（21.3 mg），9（17.2 mg），10（9.1 mg），正丁醇提取物分离得到化合物1（40.0 mg），2（35.0 mg），3（7.0 mg），4（30.0 mg），5（10.0 mg）6（7.0 mg），7（15.0 mg）。
3 结构鉴定化合物1 白色无定形粉末。
根据ESI-MS+ m/z：493 [M+Na]+，推测分子式为C30H46O4。
1H-NMR ( CD3OD ) 高磁场可以观察到7个角甲基峰δH ：0.87，0.92，0.99，1.01，1.04，1.73 ( each 3H，s )，1.09 ( 1H，d，J = 7.0 Hz )；低磁场可以观察到δH ：3.31 ( 1H，overlapped )，δH ：3.93 (1H，m)，烯氢信号δH ：5.38 (1H，br s ) 。
13C-NMR( CD3OD ) 和DEPT可以观察到：化合物1共有30个碳，其中高磁场观察到7个角甲基δC：17.8，18.6，19.2，19.9，22.4，22.6，29.7；中低磁场观察到8个亚甲基CH2 ( δC 19.2，24.3，27.5，29.4，32.3，35.6，35.7，43.0 )，5个次甲基CH ( δC 35.9，48.7，49.3，67.1，79.9 )，5个季碳C ( δC 39.3，39.5，40.3，45.8，49.0 )；2个双键( δC 127.0，139.9 ；δC 134.3，137.0 )和1个羰基碳δC180.3峰。
其中2个次甲基碳CH ( δC：67.1，79.9 )推测连接有吸电子基团羟基。
由化合物其中一个甲基的化学位移[1.73 ( each 3H，s )]可推测该甲基和双键相连。
以上波谱数据推测该化合物为三萜类化合物。
由化合物的1H-NMR 和13C-NMR，结合化合物的HSQC，HMBC可以推测该化合物可能为乌苏烷型三萜结构，为了进一步确定该化合物的空间结构，我们测定了化合物1的NOESY 谱图，得到：H-3与H-23，H-2与H-25分别呈现很强的NOE相关性，推测2、3位羟基的空间构型分别为2α，3α。
结合以上波谱解析和文献检索，化合物1与文献[4]报道的从该植物中分离得到的三萜2α，3α-dihydroxyurs-12,18-en-27-oic acid的13C-NMR数据一致。
鉴定该化合物为2α-3α-dihydroxyurs-12,18-en-27-oic化合物2 白色无定形粉末。
根据ESI-MS+ m/z：493[M+Na]+，推测分子式为C30H46O4。
1H-NMR (CD3OD ) 高磁场观察到7个角甲基峰δH ：0.85，0.87，0.97，0.99，1.01，1.52，1.54 ( each 3H，br s )，；低磁场显示δH ：3.43(1H，s )，δH ： 4.01 (1H，m )，δH ： 5.46 (1H，br s )。
化合物2的13C-NMR (CD3OD) 和DEPT的波谱数据与化合物1的波谱特征一致，推测化合物2也为乌苏烷型三萜，并且有两个双键。
比较这两个化合物的波谱数据可知，化合物2和1具有相同的A，B，C环，最大差异是化合物2的双键位置发生了变化。
为了进一步确定其结构，我们测定了化合物2的2D-NMR：HSQC，HMBC，为了进一步确定化合物2的立体结构，测定了NOE，波谱数据显示：H-3与H-23，H-2与H-25分别呈现很强的NOE相关性，推测2、3位的羟基空间构型分别为2α，3α。