青海畜牧兽医杂志2016年第46卷第1期（总第241期）收稿日期：2015-12-271病原学在1977年,美国学者Eugster 和Nairn 最早从患有出血性肠炎的犬的粪便中分离得到了该病毒,之后,澳大利亚、法国、日本、南非和意大利等国均有此病的报道。

我国也有学者对该病进行报道，梁士哲等于1982年最早报道了类似由犬细小病毒（Canine parvovirus ，CPV ）CPV 所致的犬出血性肠炎，次年徐汉坤等对该病进行了正式报导。

经研究〔1~4〕表明，CPV 是细小病毒科、细小病毒属中的一个举足轻重的成员，它与该属的猫泛白细胞减少症病毒（FPV ）和水貂病毒性肠炎（MEV ）之间有密切的抗原关系〔5〕。

CPV 属于细小病毒科(Parvoviridae)细小病毒属(Parvovirus)。

目前研究发现，犬细小病毒只有一个抗原型，即CPV-2。

CPV-2粒子为等轴对称的二十面体，无囊膜，核衣壳为等轴对称的20面体，在电镜下呈圆形或六边形，直径约为23nm 。

核酸是由单股DNA 构成的,DNA 分子质量为1.4×106-1.7×106，沉淀系数为23S-27S 。

该病毒有VP1、VP2、VP3三种多肽，其中衣壳蛋白的主要成分是由VP2构成的，它具有血凝活性，犬细小病毒在4℃和25℃条件下都能凝集猪和恒河猴的红细胞，但不可以凝集其他动物的红细胞，这一特性可作为病毒鉴定的参考指标〔7〕。

近些年来，犬细小病毒的血凝性、抗原及宿主范围有了改变，目前研究表明CPV-2有a 、b 、c 三个亚型，但它们对于致病性无明显差异，而我国目前以CPV-2a 流行为主〔6〕。

它对某些化学药物有一定抵抗性，如酒精、乙醚、氯仿；福尔马林、β-丙内酯、氧化剂等对该病毒有抑制作用,同时该病毒对温度也有一定耐受性，紫外线可以使其失活。

2流行病学犬细小病毒主要经消化道传染，全年均可感染，城市饲养犬的感染率比农村饲养犬的感染率要高。

品种和年龄对该病的发生没有限制，日常饲养中，由于犬的长途运输，食物、水源、环境的改变，以及寒冷、狭窄的环境对犬造成的应激均会促进该病的发生。

该病毒对纯种犬易感，以2~4月龄的犬感染为主，尤其是刚断奶或者还未断奶的犬容易感染。

其中1月龄左右的犬易患心肌炎型，2~5月龄的犬易患肠炎型。

有证据表明，人、虱、苍蝇和蟑螂可成为机械携带者，健康犬接触污染的饮水、食物或者患病犬的粪便，都是其主要传播途径〔8〕。

3发病机理Meunier 和MacCartney 等对犬细小病毒感染的发病机理进行了细致的研究〔9〕。

首先病毒经消化道感染犬，主要攻击犬的上皮细胞和心肌细胞，然后犬分别表现胃肠道症状和心肌炎症状，幼犬多见于心肌炎型。

病毒有一定的潜伏期，侵入机体后被感染的前2天,首先在口咽部复制,随着血流传播到其它器官,病毒感染的第3d 到第5d 时会出现病毒血症〔10〕。

病毒在口鼻迅速传播，这也是我们使用胶体金试纸检测时需要采口鼻部分泌物的原因；然后病毒在咽喉部的淋巴组织、肠系膜淋巴组织以及胸腺开始复制，随后感染小肠的肠隐窩，引起犬的腹泻，此时可以在肝、肺、脾、肾、心肌分离出该病毒。

在严重感染的情况下,常常会出现嗜中性白细胞减少症和淋巴细胞减少症〔11〕。

犬感染细小病毒后的3~4天开始通过粪便向外界排毒,有的犬会排大量红色稀便，有时呈喷射状，此时病毒呈单个散在,传染性最强，而7~10天后，动物的肠黏膜产生IgA ，犬细小病毒特异抗体增多,使散在的病毒被凝集在一起,此时动物的感染性降低,血凝性也大大降低甚至丧失。

同时可以检测到血清抗体,血清抗体可以在体内保持至少1年〔12〕。

4临床症状及病理变化4.1临床症状犬细小病毒的自然潜伏期在5~7天，临床表现肠炎型和心肌炎型。

4.1.1肠炎型该类型发病的犬常发生于2~5月龄犬，潜伏期约在1~2周，其临床表现为病犬呕吐、腹泻，呕吐物开始为白色泡沫状，继而粘稠少量，逐渐变成黄色，极少数有淡绿色胆汁吐出并且带有血丝。

排便次数增多，排黄色或灰黄色粪便，粘稠腥臭。

中期表现为频繁呕吐，无食欲，腹泻常呈喷射状，排出番茄汁样粪便带有脱落的肠黏膜，体温可达40℃。

后期的病犬体温下降至常温以下，可视粘膜表现苍白，肛门肌肉松弛，呼吸困难，脱水严重，各个器官衰竭而死。

脱水主要表现为眼窝深陷，犬的鼻干燥，皮肤弹性下降，严重者昏迷休克。

病程在一周左右，抵抗力较高或者打过疫苗的犬的症状较轻，治愈率较高，恢复较快。

4.1.2心肌炎型该类型常发生于1月龄幼犬。

其症临床状往往突然表现出来，病程较急，初期的精神尚好，仅有轻微的腹泻、呕吐和体温升高，随后发展迅速。

病犬的临床症状有可视粘膜苍白，病犬迅速衰弱，表现呻吟，有干咳、呼吸困难等症状，听诊常有有心内杂音，心律不齐等，病犬因急性心力衰竭突然死亡。

4.2病理变化4.2.1肠炎型病犬逐渐消瘦，经常蜷缩，由于脱水，弹性降低，眼窝下陷，鼻也出现干燥，肛门由于长时间排稀便变得松弛，周围有粪便污染。

犬由于呕吐，无法进食，胃内无食物，导致胃粘膜有大量的出血斑和溃疡灶。

细小病毒感染肠隐窩胚上皮组织，使上皮细胞遭到破坏和萎陷，犬的肠绒毛变短。

脾脏有广泛淤血,淋巴细胞弥漫性坏死，个体变小。

动脉周围组织淋巴鞘变宽。

肺脏的颜色较深红，挤压有血性泡沫，肺表明有出血点，肺泡毛细血管扩张、充血、出血,肺泡隔变厚,肺泡腔变小,其内可见脱落的上皮细胞、嗜中性粒细胞和大量红细胞〔13〕。

4.2.2心肌炎型心肌型病变主要表现在肺和心脏。

肺脏呈灰红色，表面出血斑点，挤压有血样液体流出；气管和支气管充满泡沫样液体；心脏主要表现为心肌细胞变细，肌纤维疏松，肌浆减少,胞核变长,局部断裂、崩解，心肌毛细血管扩张，有充血的现象。

心肌为白色条纹状，左心室壁变薄。

具有诊断意义的病理变犬细小病毒病研究进展王羽迪，郝满良，张程,李俊杰（河北农业大学动物医学院，保定，071000）摘要：本文从犬细小病毒病的病原学、流行病学、诊断以及防治方面做一综述。

关键词：犬细小病毒病；病原学；流行病学；诊断；防治中图分类号：S855.3文献标识码：A 文章编号：1003-7950（2016）01-0046-0346青海畜牧兽医杂志Chinese Qinghai Journal of Animal and Veterinary Sciences1/2016Vol.46,No.146卷1期化是在新建纤维有核内包含体。

5临床诊断犬细小病毒病的急性和典型病例较易做出初步诊断，但是对于不典型的犬细小病毒病感染，尤其是幼犬在感染以后，所表现出来的复杂的症状很难作为诊断的依据，其临床症状与犬的冠状病毒感染相类似，应注意排除，因此还需要借助实验室诊断技术进行确诊。

5.1动物试验对犬CPV的检测方法，最敏感的就是用易感的幼犬进行接种试验。

首先对试验的幼犬进行中和试验，排除犬瘟热和猫泛白细胞减少症的感染。

由于低毒力CPV毒株的普遍存在，此时某些幼犬并不会有表现出典型的CPV症状，但是我们也应该进行血液中的病毒分离。

5.2病毒分离病毒分离首先取病犬粪液或肠内容物，加入适量的氯仿混匀，置于4℃过夜处理，经离心处理后取上清液接种MDCK、F81等传代细胞进行分离培养病毒，也可用荧光抗体染色、微量血凝试验和血凝抑制试验等对病毒进行鉴定。

MartinelloF等对115份狼粪样品分别用ELISA、HA和病毒分离技术进行了检测,其中在4份样品中分离并获得到了该病毒，并通过电镜检查得到了证实,这是首次确切的观察到了欧洲狼体内的CPV〔14〕。

5.3血液学检测患犬的血液学检测可得到白细胞数目减少,通常正常犬的白细胞数目为(6-11)×109/L，发病后有时小犬可降到(0.1~0.2)×109/L,大犬的白细胞数目为(0.5~2)×109/L,鉴于其他疾病在引起的犬的腹泻的同时也会使白细胞减少,所以血液学检测只能作为辅助检测。

对于病犬的血常规进行检测，发现有大量异型淋巴细胞出现，呈典型的病毒感染血像〔15〕。

犬感染细小病毒病后，其血液中WBC、HGB和MCH指标明显降低；其中幼年患病犬HGB比成年犬脱水现象更严重，HGB降低更明显；成年患病犬血液Lym所占WBC的比例要高于Gran，而幼年患病犬则相反〔16〕。

5.4电镜检查5.4.1直接电镜（EM）检查取病死犬的心肌坏死区做超薄切片，电镜检查心肌细胞核内的包涵体，可以见到大量的CPV颗粒，其直径约为20~22nm。

在肠的内容物提取液中，电镜检查则可见有较多的成堆的细小病毒粒子，其直径在15~20nm，形状为实心和空心的圆球形。

取发病2~5d的病犬的粪样，经过离心后取上清液，加入磷钨酸负染后进行电镜观察，病初可见到大小均一、呈现分散的病毒粒子，而在感染后期，病毒呈现聚集状态。

5.4.2免疫电镜（IEM）检查免疫电镜检测比直接电镜更为敏感，为了鉴别非致病性CPV和致病性CPV，采用免疫电镜检查，当非致病性CPV与CPV免疫血清作用不会产生聚集状态，而致病性CPV与CPV免疫血清则会发生聚集。

李六金等用免疫金电镜技术检测了CPV免疫球蛋白(Ig)，检测结果证明驴抗犬细小病毒所产生的Ig对CPV具有较强的反应特异性〔17〕。

5.5血凝和血凝抑制试验根据CPV能够凝集猴或猪的红细胞，而不会凝集马、猫、鼠等动物的红细胞这一原理，人们建立起来的HA-HI试验，它是目前最常用的较为简便、敏感的诊断犬细小病毒病的方法。

该方法是要采取病犬新鲜粪便或病死犬肠内容物，然后按照病毒分离的方法制取病毒悬液，再进行HA和HI试验，不足之处是要常制备猪红细胞。

5.6ELISA试验该方法检测具有方便、快捷、灵敏度高的特点，并且在国外已广泛应用，已有商品试剂盒。

1994年, Drane DP等建立了一种CPVELISA,此方法可在野外对犬粪便中的CPV抗原进行快速检测。

国内外学者先后建立了间接ELISA、抗原竞争ELISA、双抗体ELISA、双抗体加心ELISA(Das_ELISA)、斑点ELISA (Dot_ELISA)、复合物捕获阻断ELISA(Ctb_ELISA）等检测CPV方法〔18〕。

5.7聚合酶链式反应（PCR）技术PCR技术是一种在DNA水平上对病毒和细菌等微生物进行诊断的方法。

比较常用的PCR技术有普通PCR、套式PCR、降落PCR、原位PCR、特异等位基因PCR、实时PCR等,各种方法各有利弊,而实时PCR比常规PCR方法更为敏感、快速和高重复性,并且能进行定量检测〔19〕。

5.8核内包涵体检查在患病犬的肠黏膜的上皮细胞和心肌细胞内可发现有核内包含体，其特点是数量不等、嗜两性染色、福尔根染色呈阳性，这一检测可以作为辅助诊断。

5.9CPV试纸快速诊断法犬细小病毒快速诊断试纸采用胶体金免疫技术，具有检测速度快，结果较为准确，灵敏度高的特点，操作时间短。