氨基酸自动分析仪
1.实验目的
①了解氨基酸自动分析仪的分析原理；
②掌握氨基酸自动分析仪的操作技巧。

2.实验原理
测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同，在阳离子交换柱上将它们分离，采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来，再逐个以另一流路的茚酮试剂混合，然后共同流至螺旋反应管中，于一定温度下（通常为115～120℃）进行显色反应，形成在570nm有最大吸收的蓝紫色产物。

其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物，其最大吸收在440nm。

这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度（或含量）之间的关系符合比耳定律，可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。

3.实验仪器与耗材
实验仪器：
耗材：
4．实验步骤
①样品处理：
测定样品中各种游离氨基酸含量，可以除去脂肪杂质后，直接上柱进行分析。

测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解，使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。

②样品分析：经过处理后的样品上柱进行分析。

上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵
敏度来确定。

一般为每种氨基酸0.1μmol 左右（水解样品干重为0.3mg 左右）。

测定必须在pH5～5.5、100℃下进行，反应进行时间为10～15min，生成的紫色物质在570nm 波长下进行比色测定。

而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。

做一个氨基酸全分析
一般只需1h 左右，同时可将几十个样品一起装入仪器，自动按序分析，最后自动计算给出精确的数据。

仪器精确度在±1～3%。

用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如下图
自动分析仪氨基酸分离图谱
5.结果计算
带有数据处理机的仪器，各种氨基酸的定量结果能自动打印出来，否则，可用尺子测量峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积进而计算出氨基酸的精确含量。

另外，根据峰出现的时间可以确定氨基酸的种类。

6.说明
①显色反应用的茚三酮试剂，随着时间推移发色率会降低，故在较长时间测样过程中应随时采用已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变化情况。

②近年出现的采用反相色谱原理制造的氨基酸分析仪，可使蛋白质水解出的17 种氨基酸在12min 内完成分离，且具有灵敏度高（最小检出量可达1pmol）、重现性好以及一机多用等优点。