常常有客户问我们:
1.如何分析脂肪酸呢?
2.大部分的问题是哪一种的气相柱最适合?
3.或是一定需要衍生吗?
答案是根据需要分析的样品基质是什么。
以下是我们推荐的四种气相柱并讨论其优点。
(1)ZB-FFAP - 这种色谱柱是用来分析没有被衍生的游离脂肪酸。
大多数的小分子量,C2 到C8 的有机酸通常不必衍生,可以顶空分析(参考应用资料8186 )。
分子量高些的样品可以溶解后,过滤,然后进样(参考应用资料14856)。
但是这结果可能会因为样品不太干净,色谱柱寿命就可能短些。
(2)ZB-WAX –使用这种色谱柱,甲酯化的脂肪酸可以得到很好的分离。
这种色谱柱对非饱和的脂肪酸的分析会比极性较低的色谱柱选择性更好(参考应用资料16320)。
但是需要注意的是这些样品在分析以前需要甲酯化。
甲酯化可以改善峰形和分析效果;甲酯化后使沸点降低,可以在较低温度下分离。
(3)ZB-1 HT,ZB-5HT 或是其他低极性的色谱柱- 甲酯化的脂肪酸的分子量较大、沸点较高的基质时特别推荐此类色谱柱。
因为高分子量和高沸点的基质很可能留存在色谱柱中。
极性较低的色谱柱在高温下较稳定,可以在较高温操作使高沸点的杂质的洗脱。
色谱柱使用寿命也比较长。
但是极性较低的色谱柱的分离度不会比极性高的色谱柱好,所以可以应用在一些特殊的样品,需要更多此类色谱柱的应用可以参考我们的应用资料14863。
此外我们的特殊柱,极性稍高MultiResidue的色谱柱,可以在较高温下操作,分离效果也好些(参考应用资料16322)。
(4)BPX-70 –是专门设计用来来分离顺式和反式脂肪酸甲酯化合物的色谱柱。
目前这类色谱柱愈来愈多被使用,因为愈来愈多的国家规定产品要标示反式脂肪酸的比例。
两种常用来甲酯衍生化脂肪酸的方法。
(1)三氟化硼方法:
a.约10 毫克的脂肪酸和1毫升10% 的三氟化硼甲醇溶液加入小玻璃瓶中。
b.然后用充氮,加热到摄氏100度五分钟
c.冷却后,加1 ml的水和5 ml的正己烷。
涡漩1分钟,然后取上层的有机液。
d.吹干后,加50-200 微升的非极性溶剂溶解。
(2)甲醇甲酯化法:(脂肪酸必须干燥,有时如果没有真空冷冻干燥处理,结果可能会不好)。
a.在有盖的塑料管中加入2 ml的正己烷脂肪酸液(脂肪酸约10 mg),然后加入0.2 毫升的2M的氢氧化钾的甲醇溶液。
b.在常温中,涡漩2分钟。
稍微离心,取有机层样品,做气相检测。