柱温：室温
检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1. 胞苷
2.尿苷
3.鸟苷
4.胸苷
5.腺苷
分析条件：
色谱柱：ODS柱 （15cm× 6.0mm） （经甲烷基化处理的ODS柱）
流动相：100mM磷酸缓冲液和 200mM高氯酸钠溶液 梯度洗脱
流速：1.5ml/min
柱温：50℃
检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1.未知峰
2.胞嘧啶
3.尿嘧啶
4.鸟嘌呤
5.腺嘌呤
6.胞苷
7.尿苷
8.胸腺激素
9.腺苷
10.鸟苷
11.胸苷
核酸
色谱柱选择方法
糖的分离
★糖的种类很多，可分为单糖（木糖，阿拉伯糖；葡萄糖，果糖，半乳 糖）、二糖（蔗糖，麦芽糖）、低聚糖和多糖。
★单糖和二糖可以使用氨基柱分离（分离异构体效果不很好），还可以 使用阴离子交换柱分离，缺点是分离时间较长。
色谱柱选择方法
肽和蛋白质
凝胶过滤：根据分子量的大小差别进行分离 离子交换：根据分子所带的电荷的差别进行分离 反相和疏水色谱：根据分子的疏水性质的差别进行分离 亲和色谱：根据复合的相互作用的差别进行分离
蛋白质
分析条件：
色谱柱：Shim-pak Diol－300 （50cm× 7.9mm） （二醇基水溶性凝胶柱，
进行洗脱；
分析条件：
核酸
色谱柱：Shim-pak WAX－1
（5cm× 4.0mm）
（叔氨基阴离子交换柱，
用于分析核苷酸）
流动相：20mM磷酸缓冲液（ pH＝7 ）
480mM磷酸缓冲液（ pH＝6.8 ）
梯度洗脱
流速：1.0ml/min
柱温：45℃
检测器：紫外（260nm）
色谱峰：1.尿苷酸
2.胞苷酸
（1）10cm～50cm内径为制备柱 （2）4cm～8cm内径为标准柱 （3）3cm一下内径为小孔柱或微孔柱和毛细管柱 （4）柱长一般为15cm、25cm、30cm；50cm一般用于制
备柱或特殊柱型，5cm一下为快速柱(包括预柱和保护 柱)
色谱柱选择方法
1.氨基酸
ห้องสมุดไป่ตู้
NH2
R C COOH H
(1)结构特殊，一般使用离子交换柱分离，阳离子交换柱是使用最广 泛,是最成熟的方法。分离氨基酸的阳离子柱分为锂型柱和钠型柱， 锂型柱可以分离谷氨酰胺和谷氨酸。
色谱柱的选择
• 大多数化合物是可以使用C18柱分离
• C18优点：柱便宜，流动相便宜，使用时间长，易于通 过改变流动相得到最佳分离，
• 药品本身具有纯度高的特点，容易分离，辅料和分解 产物是分离的难点。
• 比中药成分的分离，体液中药物成分的分离，微量成 分的分离，杂质成分的分离，食品中药物残留的分离 简单的多。
色谱柱的分类
1． 根据担体材料分类
（1）硅胶型：SiO2；C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2；苯 基
（2）聚合物型： 聚苯乙烯类（离子交换；凝胶色谱柱）； 聚丙烯酸酯（离子交换）； 聚乙烯醇：C18；离子交换
（3）钛柱：比硅胶型的稳定性提高 （4）其它类型
色谱柱的分类
2. 根据分离方式分类
选择色谱条件的方法
• 1．查文献，学习别人的方法
• 2．文献中没有的新药和新化合物可以使用结构类似化 合物的色谱条件
• 3．自己积累药物分析的色谱条件，从中寻找规律，尤 其是要总结解决问题的方法。把自己积累的方法用于 以后的色谱分析中。
不建议在自己对被分离物质的性质不了解的情况下，自己摸索色谱条件
(2)反相柱也可以分离氨基酸，但不能分离所有氨基酸。柱前衍生化 法分离水解氨基酸也非常有效，且方法简便，所用的仪器简单。
氨基酸分析
分析条件：
色谱柱：Shim-pak ISC-07/S1504Li（15cm× 4.0mm） （Li型磺酸基，氨基酸分析专用柱） 流动相：柠檬酸缓冲溶液，梯度洗脱 流速：0.3ml/min 柱温：55℃ 检测器：荧光（Ex.238nm,Em450nm） 方法：OPA柱后衍生化法
(1)正相：SiO2； CN；NH2；苯基 (2)反相：C18；C1三甲基；C2；C4；C8；CN；NH2 ；苯基 (3)离子交换：弱碱阴离子交换；弱酸阳离子交换
强碱阴离子交换；强酸阳离子交换 (4)凝胶过滤：水溶性凝胶过滤；油溶性凝胶过滤 (5)其它类型：手性柱等
色谱柱的分类
3.根据色谱柱尺寸分类
N HN
NH2 N
N
N
N CH2OH
HH
H
H
OH OH
NH2 N
N
N
OH
N HO P O CH2
O
HH
H
H
OH OH
NH2 N
N
腺嘌呤（核酸碱基）
腺苷（核苷；核酸碱基＋糖）
腺苷酸（核苷酸；核苷＋磷酸）
腺嘌呤（核酸碱基）和腺苷（核苷；核酸碱基＋糖）用阳离子交换柱或反相柱进行分离； 腺苷酸（核苷酸；核苷＋磷酸）用阴离子交换柱分离，选择合适的流动相也可以用反相柱
流动相：硫酸铵/磷酸缓冲液（ pH＝7 ） 梯度洗脱
流速：0.5ml/min 柱温：室温 检测器：紫外（220nm） 色谱峰：1.细胞色素C 2.肌红蛋白
3.核糖核酸酶A 4.铁传递蛋白 5.糜蛋白酶原A
色谱柱选择方法
核酸
核酸在生命科学领域中占有重要位置，在今后的新药研发领域中同样占有重要位 置。核酸可以分为一下三类：
蛋白质分析专用柱）
流动相：10mM磷酸缓冲液（ pH＝7 ） 和0.1MNaCl
流速：1.0ml/min 柱温：室温
检测器：紫外（280nm）
色谱峰：1.谷氨酸脱氢酶 2.乳酸脱氢酶
3.烯醇酶
4.腺苷酸激酶
5.细胞色素C
蛋白质
分析条件：
色谱柱：Shim-pak Diol－300 （50cm× 7.9mm） （消除残留硅醇基C2柱， 300A多孔硅胶）
色谱条件包括以下内容：
1.仪 器：生产商，型号 2.色谱柱：柱商品名称，填料商品名称，填料类型，
色谱 柱长度（cm）和内径（mm），填料粒经（um） 3.流动相：流动相组成和比例，流速（ml/min） 4.检测器：型号及参数（如波长nm） 5.进样量：体积（ul） 6.柱 温：（℃）
其中我们更为关心的是：色谱柱和流动相（本章节主要讨论的问题）
3.腺苷酸
4.鸟苷酸
5.尿苷二磷酸 6.胞苷二磷酸
7.腺苷二磷酸 8.尿苷三磷酸
9.鸟苷二磷酸 10.胞苷三磷酸
11.腺苷三磷酸 12.鸟苷三磷酸
核酸
分析条件：
色谱柱：Shim-pak SBC－C8
（15cm× 2.5mm）
（小孔径硅胶键合C8）
流动相：20mM磷酸二氢钾缓冲液/甲醇（93/7）
流速：0.5ml/min