紫外可见分光光度法测食品中苯甲酸含量
实验目的
１、掌握紫外分光光度计的使用方法及正确操作方法； ２、了解不同食品中防腐剂测定的预处理方法及测定方法；
实验原理
为了防止食品在储存、运输过程中发生腐败、变质，常在食品中添加少量防腐剂。防腐 剂使用的品种和用量在食品卫生标准中都有严格的规定，苯甲酸及其钠盐、钾盐是食品卫生 标准允许使用的主要防腐剂之一。其使用量一般在 0.1%左右。苯甲酸具有芳香结构，在波 长 225nm 和 272nm 处有 K 吸收带和 B 吸收带。
碱性，定容至 100ml,放置 30min，过滤，取 10ml 滤液于 125ml 分液漏斗中，加入(1+2v)盐 酸溶液酸化，然后用乙醚进行萃取，其余过程与液体样品处理相同。
二、标准曲线的绘制： 取苯甲酸标准使用液 0、1、2、4、6ml 分别置于 100ml 容量瓶中，各加入 5%NaHCO3 溶液 2ml，(1+2v)盐酸溶液２ml，加水至刻度，摇匀。放置 15min,尽量让 CO２逸尽。 用 1cm 吸收池于波长 230nm 处测定其吸光度。以吸光度为纵坐标，以浓度为横坐标绘 制标准曲线。 取样品处理液 10ml 于容量瓶中加入(1+2v)盐酸溶液 2ml,摇荡以排除 CO２，加水至刻度、 摇匀、放置 15min，与标准系列一起进行比色测定，根据测得吸光度，在标准曲线上查出其 对应量，就可以计算出样品中苯甲酸（钠）含量。
由于食品中苯甲酸用量很少，同时食品中其它成分也可能产生干扰，因此一般需要预先 将苯甲酸与其它成分分离。从食品中分离防腐剂常用的方法有蒸馏法和溶剂萃取法等。本实 验测定雪碧中苯甲酸，样品不用处理，苯甲酸（钠）在 225nm 处有最大吸收，可在 225nm 波长处测定标准溶液及样品溶液的吸光度，绘制标准曲线法，可求出样品中苯甲酸的含量。
三、计算与结果
1．记录数据
将标准溶液的质量浓度 ρ 和扣除 A0 的吸光度 A 数据填入表 1 中
表 1 苯甲酸标准溶液浓度及吸光度测定数据
测定
0ml
1ml
2ml
4ml
6ml 酱油
果冻
ρ /mg ·mL－1
A
思考题
1. 举例说明日常生活中遇到的哪些食品中有防腐剂？ 2. 用什么方法从样品中把苯甲酸分离出来？ 3. 如何确定样品中防腐剂为苯甲酸？ 4. 苯甲酸通过什么排泄？ 5. 如何利用一元线性回归法绘制标准曲线及计算样品中苯甲酸含量？
实验步骤
一、样品处理:
液体样品:
取酱油 10ml 于１２５ml 分流漏斗中，加入(1+2v)盐酸溶液２ml 进行酸化，用无水乙醚
萃取二次，每次３０ml，每次振摇１min。
合并乙醚层于另一干净分流漏斗中，用５％NaCL 溶液洗涤二次，每次５～１０ml。然
后蒸馏瓶回收乙醚，用 20ml5%NaHCO3 溶液溶解，定容至１00ml 备用。 固体或半固体样品：如果冻等，将样品捣碎，称取 10g 左右，用 10%NaOH 溶液调节到