红细胞血型检测
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（一）、 概念：不规则抗体是指血清中抗-A、抗-B以外 的其他血型抗体，也称意外抗体。不规则抗体 包括同种抗体和自身抗体。ABO血型中的亚型 也称为不规则抗体。 自身抗体：受血者体内产生的抗体，针对自己 本身的红细 胞抗原。 同种抗体：不只针对自身抗原，也与同种异型 抗原发生反应。
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（一）、原理 根据红细胞膜表面上有无A 抗原或B抗原，将血 型分为 A型、B型、AB型、O型4种。A型人血清 中含有抗-B抗体，B型人血清中含有抗-A抗体， O型人血清中含有抗-A抗体和抗-B抗体，AB型 人血清中不含ABO抗体。 正定型：用抗-A及抗-B试剂与被检红细胞反应， 检测红细胞表面是否存在A抗原或B抗原。 反定型：用标准A细胞及B细胞与被检血清反应， 检测血清中是否存在抗体。 由于ABO血型系统抗体多数为IgM类，在室温盐水 介质中就能出现明显的凝集反应。
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(三) 弱D型(Du型)血型及其鉴定： Du型抗原是RhD的弱抗原，这种抗原通常与IgM 类抗D试剂不产生直接凝集反应，而与部分的 IgG抗D血型用间接抗球蛋白试验反应阳性。因 此当我们初次得到Rh阴性结果时，必须进行Rh 阴性确认试验，即用三种不同批号的IgG抗D定 型，如果全部阴性方可认为该被检者为Rh阴性， 否则，只要有一批为阳性，则可认为是Du型。 弱D人群作为献血者按照RhD阳性对待，其血液只 能给Rh阳性受血者输注；作为受血者按照RhD 阴性对待，只能接受RhD阴性血液。
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（二）Rh(D)定型和定型试验中应注意的问题： Rh定型主要鉴定D抗原（IgG抗D和IgM抗D）。 Rh系统是最为复杂得多一个系统，涉及临床的 主要有D、C、c、E、e五个抗原，其中D抗原的 免疫原性最强，仅次于A或B抗原。 Rh血型鉴定方法有：玻片法、试管法、微量板 法、微柱凝胶法等，试管法最为经典。目前大 部分医院都使用微柱凝胶卡式血型鉴定，方法 简便快捷，准确度较高。
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1.输血前主要包括哪些内容？ 2.受血标本接受时的注意事项有哪些？
3.ABO血型和RhD血型鉴定时的注意事项有哪些？
4.交叉配血试验的影响因素有哪些？
5.抗球蛋白试验的临床应用有哪些方面？
6.红细胞血型分子生物学检测技术主要有哪些？
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学习要求：
了解： 红细胞血型分子生物学检测。 熟悉： 交叉配血实验技术的分类及各自的操作步骤及原理。 掌握： 1.输血前检查内容。 2.受血者标本接收时的注意事项。 3.ABO血型和Rh血型鉴定时的注意事项。 4.交叉配血试验的方法及影响因素。 5.抗球蛋白试验技术。 6.不规则抗体的筛选和鉴定。
输血前检查的主要程序：患者的病史和标本等 的检查、核对及处理；ABO血型和RhD血型定型； 红细胞同种抗体筛查和鉴定；交叉配血试验。
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（一） 标本的采集 输血除了需要达到预期的治疗效果外，必须确保输血安 全。 血样由临床护士完成，严格遵守一次只能为一位受血 者抽取标本，标本不得从输液管或输液侧静脉中抽取。 （二）标本的接收 输血科技师接收血样标本时，应认真核对受血者的相关 信息，尽可能了解受血者有无输血史、药物史、妊娠史 等情况。如果有输血史，这有必要进一步了解最后一次 输血的日期，若3个月内输过血，那么供血者的红细胞 没有完全代谢消失，可能依然存在于血液循环中，导致 血型定型试验中出现混合凝集的结果。
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5. 微柱凝胶卡式检测法：凝胶过滤技术+免疫学 抗原技术
（三）、不规则抗体的鉴定
抗体筛选试验用的试剂筛选红细胞，通常是2 或3人份的非混合O型红细胞。 一旦抗体被检出，应作抗体鉴定试验，以确定 其特异性。抗体鉴定实验包含以下主要内容： (1)自身细胞检查：观察患者(受者)的血清与患 者(受者)自身细胞的反应情况，确定血清内是 否有自身抗体或自身抗体和同种抗体二者同时 存在。 (2)谱红细胞：使用试剂细胞中的谱细胞，应用 各种抗体检查技术，检测患者的血清，确定其 抗体的特异性。
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5)近期输血：试验前曾输入过其它ABO血型不一致的 血液，使血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定 型时显示“混合外观凝集”现象。 6)嵌合体血型：这种血型者体内有两类血型红细胞群 体，定型时可以出现“混合外观凝集”现象。 7)疾病因素导致抗原减弱：某些白血病或骨髓增生异 常综合征等受血者，ABO血型抗原在红细胞表面表 达受到抑制，导致正、反定型不符。 8)红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面 异常，如细菌酶作用，几乎与所有人的血清发生凝 集。 9)获得性B：由于革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获 得“类B”的活性，常见于患肠道疾病的A1血型受血 者。
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10)血型特异性物质过高：一些卵巢囊肿病例，血型 物质的浓度很高，可中和抗A和抗B定型试剂，要得 到正确的正定型结果，必须洗涤红细胞多次。 11)近期内进行大量的血浆置换治疗：由于使用大量 的非同型的血浆作置换治疗，标本血清中含有所输 供体提供的抗A或抗B抗体，造成反定型错误。 12)异常的血浆蛋白：受检者血浆中异常的白蛋白、 球蛋白比例和高浓度的纤维蛋白原等导致红细胞缗 钱状形成，造成假凝集现象。 13)不规则抗体的存在：受检者血浆中，含有ABO血 型抗体以外的不规则抗体，与试剂红细胞上其他血 型抗原系统的抗原起反应。
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1.ABO定型
最适的反应温度为4℃，但在室温
反应良好，所以常规的ABO定型试验仅在室温
进行。
(1)定型方法：正、反定型的试管离心方法目前仍
被认为是最可信赖的ABO定型方法。
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2)ABO亚型的鉴定： ABO亚型的鉴定通常使用下列试剂：抗A、抗B、 抗A1、抗H、抗AB、A1红细胞、A2红细胞、B型
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(1)导致Rh血型鉴定可能出现假阳性的原因： 1)直接抗球蛋白实验阳性：标本采自因血型不合造 成的急性血管内溶血或自身免疫性溶血贫血患者。 2)受检红细胞与抗血清孵育的时间过长，含高蛋白 的定型试剂会引起缗钱状形成。 3)标本抗凝不当，受检过程中出现凝血或小的纤维 蛋白凝块，误判为阳性。 4)定型血清中含有事先未被检测的其它特异性抗体， 造成假阳性定型结果。 5)多凝集细胞造成定型的假阳性。 6)鉴定用器材或抗血清被污染，造成假阳性。
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直接抗人球蛋白实验（DAT）强阳性：婴儿患 有新生儿溶血病，红细胞被Rh抗体（常为抗-D） 附着。 2)受检细胞悬液浓度太高，与抗血清比例失调。 3)漏加或错加定型血清。 4)离心后重悬细胞扣时，摇动用力过度，摇散微 弱的凝集。 5)弱D抗原或D变异型与某些抗-D不发生反应。
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第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 第六节 第七节 第八节 第九节 术
输血前免疫学检查 盐水介质试验技术 酶处理试验技术 抗球蛋白试验技术 聚凝胺介质试验技术 微柱凝集试验技术 吸收放散技术 凝集试验技术 红细胞血型分子生物学检测技
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目的：输入的血液成分在受血者的体内发挥其 有效作用. 在正常情况下，输入的红细胞在受血者体内不 溶血，输入的血浆成分不破坏受血者的红细胞。
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抗体鉴定试验结果的解释及处理：
1.与谱细胞反应明显，确定为单一抗体或无法确定为单 一抗体，应加以鉴别。 2.与谱细胞呈弱反应，结果不明确 （1）分析结果： ① 是否符合剂量效应 ② 谱细胞是否新鲜 （2）改变试验方法： ①使用高灵敏度的方法重复试验 ②添加试剂后重复实验 ③待抗体增强后重复试验
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（三）标本的要求
1. 对输血前检查的血液标本应严格要求能代表受血者 当前的免疫学状况，标本还需经鉴定和标记，保证 其准确无误地来自受血者和供血者，应和血液申请 单上的内容一致。 2. 防止受血者血液标本稀释和（或）溶血，若采集过 程中发生溶血则不能使用。 3. 受血者配血试验的血液标本必须是输血前3天采集的。 4. 若受血者使用右旋糖酐、PVP等治疗，应注意洗涤被 检红细胞。 5. 每次输血后，受血者和供血者的标本必须保存于 2~8℃至少7天。
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14)低丙种球蛋白血症：低丙种球蛋白血症(丙种 球蛋白量减低)病例，可能会因免疫球蛋白水 平下降而使血清定型时不凝集或弱凝集反应。 15)药物等因素：药物、右旋糖酐及静脉注射某 些造影剂可引起红细胞凝集或类似凝集。 16)年龄因素：免疫系统尚未健全的婴儿、由母 亲被动获得抗体的婴儿，或抗体水平下降的老 人，试验时可出现异常的结果。 17)防腐剂因素：患者体内可能含有对防腐剂中 的成分或对混悬介质的抗体，导致ABO定型差 错。
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（4）假凝剂：在干扰因子的作用下可造成红细 胞假凝集 （5）酶引起的多凝集 （6）补体的影响 5.与谱细胞不反应，自身细胞阳性 可能是自身抗体或C₃阳性
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（四）、抗体筛查和鉴定的影响因素 1.抗体筛查和鉴定细胞的质量 筛查细胞不包括低频率抗原，不能检出低频率抗原。 谱细胞：用于抗体鉴定的试剂红细胞。 在选择不规则抗体筛查或鉴定细胞时，应符合本地 区不规则抗体分布的特点。 2.试验方法 IgM抗体在4℃，凝集强度明显大于室温，37℃会有减弱 3.抗体的特异性 抗体筛查试验为阴性，并不意味着被检血清中一定没有抗体 筛查细胞漏检ABO亚型抗体（如抗-A₁） ③有些抗体在盐水介质中可溶解抗原不配合的红细胞，出现溶 血现象。 ④应在标本采集48小时内完成实验，放置时间过久，可能造成 抗体减弱导致漏检。
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3.与所有谱细胞反应，自身细胞阴性 （1）强度不一致：可能存在混合抗体 （2）强度一致：抗体可能为专于O细胞反应的抗体 （如：抗-I、抗-H、抗-HI） 可能针对高频抗原的抗体 可能针对谱细胞的抗体 4.与所有谱细胞反应，自身细胞阳性 （1）存在自身抗体 （2）同种和自身抗体同时存在 （3）冷凝集：在冷凝集素的作用下存在凝集红细胞