李淑娟等：金属萱台亲和层析介质用于六聚组氨酸融台蛋白的纯化研究
度测定结果可粗略计算：２００血裂解液纯化后所得
ｃＤｌ５５Ｄ１融合蛋白量约为２００旭。
２．５ｃｏ．ｃＭ．Ａｓｐ－ｓｅｐｈａｒ∞ｅ用于六聚组氨酸融合蛋
白大量纯化的初步研究
根据小量纯化的优化条件，将介质体积放大２５
倍纯化六聚组氨酸融合蛋白ｃＤｌ５５Ｄｌ，取５０％的
ｃｏ－ｃＭ．Ａ叩一ｓｅｐｈａｒ姻ｅ悬浮液１．５ｍＬ与５ｍＬ含
ｃＤｌ５５Ｄｌ的细胞裂解液孵育，ｃｏ．ｃＭ．Ａ８ｐ．ｓ８ｐＩｌ哪ｓｅ
悬浮液装入层析柱中，洗柱后用５ｍＬ含２００ｍｍｌ，Ｌ
咪唑的ｃ液洗脱蛋白，收集洗脱液５ｍＬ。
用Ｂｍｄ州
法测定蛋白浓度并计算可知蛋白质总量为４．６ｎ蜗。
２．６Ｃｏ・ＣＭ－Ａｓｐ．ｓｅｐｈａｒｏ辨与Ｎｉ・ＮＴＡ・Ａ辨ｒｏ辨的比较
将ｃｏ．ｃＭ．Ａｓｐ—ｓｅｐｈ删ｓｅ与商品化Ｎｉ—Ｎ１俳Ａｇａｒｏｓｅ进行蛋白纯化的比较，取５０％的ｃｏ－ｃＭ．Ａ８ｐ．
ｓｅｐｈａｌｏｓｅ悬浮液和５０％的Ｎｉ．ＮＴＡ．Ａ静ｒｏ特悬浮液各６０皿分别与２００ｆｔＬ含六聚组氨酸融合蛋白ｇｐ４ｌ（分子量３６ｋＤ）的细胞裂解液孵育，并按各自清洗溶液对介质清洗后洗脱蛋白，对纯化后的剩余液和洗脱
液进行ｓＤＳ．ＰＡＧＥ，结果如图６所示。
从图６中可看出经ｃ０．ＣＭ．Ａｓｐ．ｓｅｐｈａｒｏ∞与Ｑｉａｇｅｎ公司的Ｎｉ．Ｎ１ｒＡ．Ａ∞”介质纯化后剩余液中蛋白质的组成几乎一
样，洗脱得到卵４１蛋白的量相当，说明两者蛋白结合容量差别不大。
但是，以Ｎｉ．ＮＴＡ．Ａ朗ｆ０８ｅ纯化后的洗脱液电泳结果中可见有少量杂蛋白的条带，而且与ｃｏ．ｃＭ．Ａｓｐ．ｓ印ｈａｒ∞ｅ相比，Ｎｉ，ＭｒＡ．Ａｇ啪眈介质纯化后剩余液泳道中杂蛋白减少较多，说明有较多的杂蛋白非特异性结合到Ｎｉ．ＮＴＡ．Ａｇｍ”介质上，便影响了纯化后所得蛋白的纯度。
这与文献中报道含镍螯台介质可与不含六个组氨酸残端的蛋白结合，因而会表现出一定非特异性吸附的结果一致““。
而以ｃｏ－ｃＭ．Ａｓｐ．ｓｅｐｈａｒｏｓｅ纯化的洗脱液电泳条带中不存在杂蛋白，可见ｃｏ—ｃＭ．Ａｓｐ．ｓｅｐｈａｍｓｅ对融合蛋白选择性高，非特异性吸附降低，因而表现出较好的纯化效果。
以羧甲基天冬氨酸为配基制备的ｃ０一ｃＭ．Ａｓｐ．
ｓｅｐｈａｒ０∞能牢固地结合金属离子从而有效防止了金
属离子的泄漏，将ｃｏ．ｃＭ．Ａｓｐ－ｓｅｐｈｍ蛇用于纯化六
聚组氨酸融合蛋白ｃＤｌ５５Ｄｌ和印４１的结果表明，该介质可大规模纯化蛋白，通用性较好，对蛋白结合选择性高，蛋白结合速度快、与现有商品化Ｎｉ．Ｎ１阻一Ａ辨ｒｏ”相比，具有可简单清洗、洗脱得到的蛋白纯度高等特点。
图６ＳＤｓ－ＰＡＧＥ对Ｃｏ＿ｃＭ．Ａｓｐ－ｓｅｐｌｌａ瑚ｅ和
Ｎｉ．ＭＨ，Ａ异ａｒｏ跎纯化融合蛋白的结果比较
Ｆｉｇ．６ＳＤｓ＿ＰＡＧＥ卸一ｙ出０ｆｐ耐ｅｉ珊出ｅ‘ｐＩｌ曲ｃａｔｉｏⅡ珊ｉＩ．ｇ（ｂＣＭ－ＡｓＰ－ｓｅｐｈｒｏ陀ⅡｎｄＮｉ－ＮＴＡ－＾ｇａ瑚ｅ８ｅｐａｒａｔｅｌｙＩ：ｐ删戚ｎｎｍｋ盯；２，３：ｄｌｌ咖矗咖Ｎｉ・ＮＴＡ・Ａ删；４：蚰畔ｍ出ＪｌＩ聃吨一ｉ—ＭＡ—Ａｇ哪种；５，６：ｄ瑚忙ｈ姗ｃｐｃＭ—Ａ妒ｓｅｐＩｌ一；７：
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