100℃-30min 100℃-30min 100℃-30min 用水蒸汽把培养基加热到100℃，分几次蒸煮以达到 彻底灭菌又保护营养成分的目的。
•适用：营养含量高、不适于用高压蒸汽灭菌 的特殊培养基、药品的灭菌。 此法麻烦、周期长
理化因素的影响—温度
4）高压蒸汽灭菌法：
• 利用水的沸点随水蒸气压力的 增加而上升，以达到高温灭菌 目的的方法。 • 方法：一般121℃（1kg/cm2或 15磅/英寸2）-20min。 • 适用：耐高温物品。 • 注意事项： • 排净冷空气； • 灭菌终了，缓慢降压； • 灭菌结束，趁热取出物品。
理化因素的影响—化学消毒剂 2、醇的代表：乙醇：70-75%杀菌效率最高 • 机理：具脱水作用，能穿透菌体进入蛋白质分 子肽链间隙，使蛋白质变性或脱水沉淀，造成 微生物死亡。
甲醇可使眼睛失明，故不宜做消毒剂；其他醇因不溶 于水，一般不用。
理化因素的影响—化学消毒剂 3、醛的代表：甲醛： 机理：固定CO2； 应用：10%的甲醛熏蒸，用于杀菌。 4、环氧乙烷：
• 机理：1）可与酶蛋白的-SH基结合，使酶失活； 2）易与带阴电荷的菌体蛋白吸附，使之变性沉淀。 E SH SH S + HgCl2 E Hg S + 2HCl
• 应用：波尔多液、红汞、硝酸银、砷凡纳明等。 • 特点：简便。但使用应谨慎，防止在体内积累。
理物：
理化因素的影响—温度
1）煮沸消毒法
• 方法：水煮100℃—30min • 适用：注射器、解剖用具等。 • 可杀死所有营养体和部分芽孢。
2)巴斯德消毒法：
• 方法： • 适用：牛奶、饮料等。 • 不破坏营养物质，并杀死病原菌。
理化因素的影响—温度
3）间歇蒸汽灭菌法：
•方法：
37 ℃培养 37 ℃培养
理化因素的影响—辐射
3、辐射 （一）电离辐射：χ 、γ 、β 射线 。
原理 ：引起水和其他物质的电离，产生游离基，破坏 DNA，从而造成细胞损伤。 特点；穿透力强，无专一性，对所有生物均有杀伤作用； 制造昂贵；难以控制。 适用：菌种诱变。
理化因素的影响—辐射
（二）非电离辐射：（ＵＶ）
• 方法：在波长265-266nm处，杀菌力最强。 • 原理：1）作用于DNA ，使同链DNA相邻嘧啶间形成嘧 啶二聚体，引起DNA结构变形，阻碍正常的碱基配对， 从而造成菌的变异或死亡。（光复活酶可修复） A A T T A A T T
性质：10.8 ℃为液体；超过为气体，易燃。
特点：穿透力强，广谱抗菌，不损害处理物品，
但作用缓慢。
理化因素的影响—化学消毒剂 （三）卤素及其化合物：
1、I：碘酒；7g I：5g KI，溶于100ml 95%乙醇。 1%碘酒10min可杀死芽孢杆菌和部分真菌， 并使流感病毒灭活。 2、氯气：漂白粉（氯化钙与次氯酸钙的混合物）
部供试微生物的最高稀释度与达到同样效果的酚 最高稀释度的比值。
理化因素的影响—化学消毒剂 通常：供试菌为金黄色葡萄球菌或伤寒沙门氏菌 • 如：甲药剂在10min内，以1：300的稀释度杀 死全部供试菌，达到同样效果，酚的稀释度为 1：100，则该药剂的 P.C. =
300 100 = 3
P.C.越大，杀菌效率越高
（四）表面活性剂：可降低表面张力效应的物质。
1、机理：使菌体细胞膜破损；与菌体蛋白质发生反
应而呈杀菌作用。
2、种类：洗必泰、新洁尔灭等 3、特点：快速、彻底、效率高。
理化因素的影响—温度
2、湿热法：利用饱和热蒸汽灭菌 特点：温度低、时间短、灭菌效果好 原因： 1) 菌体内含水量越高，则凝固温度越低； 2) 蒸汽冷凝会放出潜热； 3) 饱和水蒸汽穿透力强； 4) 湿热易破坏细胞内蛋白质大分子的稳定 性，主要破坏氢键结构。
理化因素的影响—温度
方法： •煮沸法 •巴斯德消毒法 •间歇灭菌法 •高压蒸汽灭菌
• 酚、醇、醛可使蛋白质变性，为常用杀菌剂。 • 种类： • 1、酚的代表：石炭酸，0.1%抑菌；1%杀菌； 5%常用，几hr可杀死芽孢。 机理：作为表面活性剂，使膜损伤；蛋白质变性沉淀； 抑制脱氢酶和氧化酶活性。 P.C.（石炭酸系数）：为消毒剂杀菌效率的标准。
是在一定时间内（10min）被测试的药剂能杀死全
影响微生物生长的 理化因素
概念：
１． 防腐 ２． 消毒 ３． 灭菌 ４． 无菌
理化因素的影响—温度
1、干热法： 1） 焚烧：适用于无经济价值的 2）干烤：利用热空气灭菌 用法：160℃,2小时 适用于玻璃器皿及耐热的器皿
特点：由于空气传热穿透力差，菌体在脱水状态下不易杀死。 所以温度高、时间长。
2）有氧时产生过氧化氢，强氧化杀菌。
• 适用：空气、水的消毒杀菌（紫外灯- 低压汞气灯）。 • 特点：穿透力差。
理化因素的影响—化学消毒剂
化学消毒剂： 对一切活细胞均有毒性
（一） 重金属及其化合物： （二） 有机物： （三）卤素：
理化因素的影响—化学消毒剂
（一） 重金属及其化合物：
• 所有重金属盐Cu、As、Ag、Hg等对微生物均有毒性。
理化因素的影响—温度
影响灭菌的因素： • 不同菌种、不同菌龄对热的敏感性不同； • 培养基成分； • 灭菌时间的对数与灭菌绝对温度的倒数呈线性 关系，即：灭菌温度越高，时间越短； • 菌浓度对灭菌时间有影响。
理化因素的影响—温度
高压蒸汽灭菌对培养基的影响:
会产生混浊或形成不溶性沉淀 改变某些营养成分： 1)低pH下，糖类、琼脂发生水解； 2）PO4-3存在，葡萄糖生成酮糖，菌不利用； 3）色深：还原糖羧基与蛋白质、氨基酸等在高温下 发生maillard反应，使糖、蛋白质等失去营养。 •形成有害物质，抑制微生物生长； •pH下降（通常下降0.2）； •改变培养基的体积与浓度。