华南师范大学实验报告
液相色谱分析混合样品中的苯和甲苯
一、实验目的
1、掌握高效液相色谱定性和定量分析的原理及方法；
2、
了解高效液相色谱的构造、原理及操作技术。

二、实验原理
高效液相色谱由储液器，泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成，储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中作相对运动，经过反复多次的吸附—解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪。

三、主要仪器和试剂
主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-10AT)[配有紫外检测器，Phenomenex ODS 柱]；
10μL微量注射器
试剂：苯标准溶液：10.0μL/mL；
甲苯标准溶液：10.0μL/mL；
苯、甲苯混合标准溶液：10.0μL/mL；
甲醇：80% ；
苯和甲苯混合待测溶液；
四、实验步骤
1、标准溶液的配制系列
用100μL的微量注射器分别量取10μL、20μL、50μL、100μL的苯和甲苯的混合标准溶液（10.0μL/mL），再分别加入90μL、80μL、50μL、0μL甲醇将其稀释，作为待测液，其浓度分别为1μL/mL、2μL/mL、5μL/mL、10μL/mL
2、色谱条件优化
①按操作规程开机，并调好色谱条件，使仪器处于工作状态。

控制流动相流速为甲醇：
0.8mL/min、水：0.2 mL/min；柱温30℃；检测波长254nm；观察记录保留时间，通过软件分析两峰分离效果。

②改变色谱条件，控制流动相流速为甲醇：0.95mL/min、水：0.05 mL/min；柱温30℃；检测波长254nm；观察记录保留时间，通过软件分析两峰分离效果。

0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
2.5
3.0
3.5
4.0
4.5
5.0
5.5min
0.01.02.03.04.05.0μV (x10,000)
色谱③通过观察两种色谱条件下的峰分离效果，选择最佳的色谱条件。

若还不能达到最佳的分离效果，可以再设定不同的色谱条件，然后根据峰分离效果，选择最佳的色谱条件。

3、苯、甲苯定性分析
在最佳条件下，待基线走稳后，用10μL 微量注射器分别进样5μL 苯和甲苯混合待测溶液，5μL 苯标准溶液（10.0μL/mL ）和5μL 甲苯标准溶液（10.0μL/mL ）(微量注射器用甲醇润洗3～5遍)，观察并记录色谱图上显示的保留时间，确定苯和甲苯的峰。

4、苯、甲苯定量分析
最佳条件下，待基线走稳后，用10μL 微量注射器分别进样1.0μL/mL 、2.0μL/mL 、4.0μL/mL 、10.0μL/mL 的苯和甲苯混合标准溶液5μL 。

观察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。

绘制苯和甲苯混合标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线。

5、苯和甲苯混合待测溶液分析
最佳条件下，待基线走稳后，用10μL 微量注射器进样苯和甲苯混合待测液5μL ，观察并记录各色谱图上的保留时间和峰面积。

根据峰面积在工作曲线上查出苯和甲苯待测液的浓度，并计算试样中苯和甲苯的含量。

五、实验数据及分析
高效液相色谱数据报告
一、色谱条件优化
0.0
1.0
2.0
3.0
4.0
5.0
6.0
min
0.00.51.01.52.0μV (x100,000)
色谱
二、定性分析
95%
80%
苯
三、定量分析
苯、甲苯混合标准溶液浓度分别为：1 ul/ml, 2 ul/ml, 5 ul/ml, 10 ul/ml。

四、未知样品浓度
六、实验讨论
①由于实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质，组分比较简单，只要在实验过程中，严格控制且定量进样，就能采用操作、计算简便的标准曲线法得出准确的实验结果，因而采用标准曲线法。

若采用归一化法或内标法，虽然能得到准确更高的实验结果，但由于实验操作及计算均较为复杂，实验及数据处理的时间长，效率相对不高，故实验中采用标准曲线法作为定量的方法。

②最佳色谱条件的选择是本实验准确度的关键。

若苯与甲苯的峰分离效果过小，苯与甲苯的峰未能完全分离，必定影响其保留时间和峰面积的计算，是实验准确度减小，数据误差加大；若苯与甲苯的峰分离效果过好，虽然能将苯与甲苯的峰完全分离，实验准确度好，但是耗费的实验时间较长，效率不好。

因而，应选择合适的色谱条件。

③为了提高标准曲线的拟合度，可以重复进样多次，并且由同一人进样，以免因个体习惯不同引起实验误差。

进样针进样时确保进样针中没有残留气泡，另外，在进不同浓度或不同的物质前因先用乙醇溶液润洗干净，以免相互影响。