实验6 高效液相色谱法的定量分析
一. 实验目的
1. 了解HPLC仪器基本结构,熟悉高效液相色谱仪的使用方法、
2. 掌握液相色谱定性分析的方法；
3. 加深对色谱分离原理的理解，掌握主要实验条件的选择
二. 实验原理
HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处理装置等组成。

其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件。

有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或保护柱、柱温控制器等，现代HPLC还有电脑控制系统，进行自动化仪器控制和数据处理。

色谱定量分析的依据是被测组分的量与其峰面积成正比。

但是峰面积的大小不仅取决于组分的质量，而且还与它的性质有关。

即当两个质量相同的不同组分在相同条件下使用同一检测器进行测定时，所得的峰面积却不相同。

保留时间(retention time，t R)——从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。

峰面积A：色谱峰与峰底之间的面积。

峰面积一般用mm2、mm×min或检测器的输出的信号单位表示。

色谱峰的面积可由色谱仪中的积分仪求得，也可通过以下方法求得：
对于对称的色谱峰：A=1.065h W1/2
对于非对称色谱峰：A=1.065 h (W0.15+W0.85)/2
三. 实验设备
高效液相色谱（HPLC）仪：waters e2695高液相色谱仪配2998二极管阵列（PDA）检测器，自动进样器，色谱柱：Kromasil C-18 250*4.6mm
四．实验内容与主要步骤
1.样品：喹乙醇经0.45 m滤膜过滤至1 m L的样品管中。

2.色谱条件：
流动相：甲醇：乙酸铵溶液（pH=4，0.02mol/L）=2：8
检测波长：270nm 流动相流速：1.0ml/min 进样量：10ul
3.开机，平衡：
打开稳压电源，待电压稳定于220 V后，依次打开Varian 210泵，Varian 335 PDA检测器电源开关，计算机主机；显示器。

双击鼠标左键打开Varian WS；待屏幕上方出现LC Workstation后，单击鼠标System control连机进入程序。

点击Method,编辑方法，点击System Setup最大压力、最小压力，后点击Save。

将该方法保存在指定的文件夹中，放上配制好的流动相，由File中打开Activate Method，选择编辑好的方法激活，平衡色谱柱，到基线基
本走平为止。

4.样品测定：最简单的单一面积比较法，以其标准溶液峰面积和样品液峰面积求出样品液中被测物质的含量。

五. 实验数据记录和处理：
喹乙醇保留时间：
喹乙醇峰面积：。