高效液相色谱定量分析实验
一、实验目的
⑴进一步熟悉HPLC仪器的基本构造及工作原理，熟悉HPLC的基本操作；
⑵了解色谱定量操作的主要方法以及各自特点；
⑶学习未知样品中甲苯的定量分析方法。

二、实验原理
⑴校正因子：
（1）绝对校正因子；（2）相对校正因子。

⑵常见的色谱定量分析方法主要有：
（1）归一化法。

特点：简单、方便、准确，但要求所有组分必须全部出峰。

（2）内标法。

特点：使用相对校正因子定量，结果准确，但操作繁琐，由于需要增加内标物，增大分离的难度。

（3）标准曲线法（外标法）。

简单、方便，由于采用绝对校正因子定量，结果受到操作技术因素以及具体色谱条件影响较大。

（4）内标标准曲线法。

三、仪器与试剂
LC-1000型高效液相色谱仪、甲醇(色谱纯)、二次去离子水、甲苯、系列甲苯标准溶液、平头微量注射器（100 l）、待测溶液
四、LC-1000型高效液相色谱仪操作步骤
⑴流动相的预处理
用甲醇和二次去离子水配成500 mL (V/V=90:10)的甲醇溶液，用0.45μm 有机滤膜过滤，超声波清洗器脱气10～20 min，装入流动相贮液瓶。

⑵高效液相色谱仪操作
（1）依次打开高压输液泵、紫外检测器电源开关
（2）打开色谱N2000在线工作站，选择通道，建立运行方法。

（3）打开三通阀(逆时针半圈)，按“Purge”排除流路中的气泡。

排气完毕后，按“Stop”
键，停泵，关闭三通阀。

按“Flow”设置流速1.0 mL/min，“Enter”确认。

（4）按“设定”键，检测波长254 nm。

按“↓”键，输入“1”，开启氘灯。

（5）按“Run”键，启动输液泵。

（6）检查基线，零点校正，待基线稳定后，用平头微量注射器取试液20 μL，将进样阀柄置于“Load”位置时注入样品，转动阀柄至“Inject”位置，同时点击软件“采集数据”。

注意！平头微量注射器用甲醇清洗3次后，再用试液清洗3次，避免气泡。

（7）待所有色谱峰流出完毕后，按“停止采集”键，保存数据并在N2000离线工作站处理数据，记录组分的峰面积。

注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“Load”和“Inject”位置，用流动相清洗2～3次。

(4) 结束工作：所有样品分析完毕后，流动相继续流动10～20 min，至基线稳定。

关闭检测器，按“Stop”停泵。

关闭泵电源。

五、实验内容
⑴分别采集系列甲苯溶液以及未知试样的色谱图，根据保留时间定性，确定甲苯组分峰的位置，并测定各自的峰面积。

⑵根据实验数据，利用外标法绘制标准工作曲线，并计算待测溶液中甲苯的含量。