②此培养基为固体培养基——在其中加入刚果红可形成以纤维素分 解菌为中心的透明圈，据此可筛选到纤维素分解菌。
【巩固1】 分析下面培养基的配方，请回答下面的问题。
纤维素分解菌的选择培养基： 纤维素粉 NaNO3 Na2HPO4·7H2O 5g 1g 1.2 g
KH2PO4
MgSO4·7H2O KCl 酵母膏 水解酪素
0.9 g
0.5 g 0.5 g 0.5 g 0.5 g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL。 (1) 此培养基配方中为微生物提供碳源和氮源的分别是 ______ 、 ______。 (2)此配方为______培养基(根据物理状态)。
(3)此培养基选择出的微生物主要是_________________________。
课题3 分解纤维素的微生物的分离
课程标准
1.研究培养基对微生物的选择作用。 2.探讨微生物的利用。 课标解读 1.简述纤维素酶的组成及作用。 2.掌握从土壤中分离某种特定微生物的操作技术。
纤维素分解菌的筛选
1．纤维素酶 (1)组成：一种 复合酶，它至少包括三种组分，即 C1酶 、
Cx酶 和 葡萄糖苷酶 。
2．筛选过程中涉及的两种培养基
(1)纤维素分解菌的选择培养基
①配方： 组分 含量/g 提供的主要营养
纤维素粉 NaNO3 Na2HPO4·7H2O KH2PO4 MgSO4·7H2O
KCl
酵母膏 生长因子、碳源、氮源 水解酪素 氮源、生长因子 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL
5 1 1.2 0.9 0.5 0.5 0.5 0.5
提示
由选择培养操作中“将锥形瓶置于摇床上 ”可推测纤维素
分解菌的异化类型为需氧型。
1．土壤中纤维素分解菌的分离流程
2．两种刚果红染色法比较
项目 内容
方法一
方法二
培养基长出菌落→覆盖 10～15 min CR ― ― → 倒去CR→加 15 min 入NaCl溶液 ― ― → 倒掉 NaCl溶液→出现透明圈
碳源、能源
无机盐
②该培养基为液体培养基，利用液体选择培养基可增加纤维素分 解菌的浓度。
(2)鉴别纤维素分解菌的培养基
①配方： 组分 酵母膏 KH2PO4 含量 1g 0.25 g 提供的主要营养
CMC－Na 5～10 g
碳源
碳源、氮源、生长因子 无机盐
琼脂
土豆汁
15 g
100 mL
凝固剂
碳源
将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL
[思维激活1] 纤维素分解菌的选择培养基中“选择因子”是什么？
提示 纤维素分解菌中唯一的碳源是 “ 纤维素粉 ” ，唯有能利用
纤维素的微生物方可在该培养基上生存，其他微生物将因缺乏碳 源而无法生存，以此，可筛选到纤维素分解菌。
1．纤维素分解菌的筛选原理
即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。
1．分离纤维素分解菌的实验设计 (1)实验流程：土壤取样→ 选择培养 (此步可省略)→梯度稀释→ 将样品涂布到鉴别 纤维素分解菌 的培养基上→挑选产生 透明圈 的菌落。 (2)土壤取样 采集土样时，可以选择 纤维素丰富 的环境。
(3)选择培养 ①目的：增加纤维素分解菌的 浓度 所需要的 微生物 。 ，确保能够从样品中分离到
配制CR溶液→灭菌→ 按照1 mL CR/200 mL 培养基比例混匀→倒平 板→培养→出现透明圈
过程
显示出颜色反应
优点 基本上是纤维素
分解菌的作用
操作简便，不存在菌落混杂问题
①由于琼脂、土豆汁中均含有淀粉类
操作繁琐，加入 物质，可能使产生淀粉酶的微生物也 形成透明圈，即假阳性反应；②有些 微生物具有降解色素的能力，它们会 降解刚果红形成透明圈，与纤维素分
(2)作用
葡萄糖苷酶 C1酶、Cx酶 纤维素― ― ― ― ― ― ― →纤维二糖― ― ― ― ― ― →葡萄糖。
2．纤维素分解菌的筛选 (1)筛选方法： 素被 纤维素酶 刚果红染色 法。
(2)筛选原理：刚果红可以与纤维素形成 红色复合物 ，当纤维
分解后，刚果红——纤维素的复合物就无法形 成，培养基中会出现 以纤维素分解菌为中心的透明圈 ，我们 可以通过 是否产生透明圈 来筛选纤维素分解菌。
缺点 刚果红会使菌落
之间发生混杂
解菌不易区分
特别提醒
(1)本实验方案中应设置普通培养基(或牛肉膏蛋白胨培
养基)作为对照实验。 (2)分离纤维素分解菌先经选择培养，其目的是增加纤维素分解菌 的浓度；然后经梯度稀释后，再涂布到鉴别培养基上。
【巩固2】 下列关于分离纤维素分解菌实验的叙述，错误的是 ( )。
果红。
2．课题延伸 (1) 为 确定得到的透明圈中的菌落是纤维素分解菌，需要进行 发酵产纤维素酶 的实验，纤维素酶的发酵方法有 液体发酵 和 固体发酵 两种。
(2)纤维素酶的测定方法
一般采用 对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖 进行定量测 定 。
[思维激活2] 由“选择培养”实验操作过程请你推测纤维素分解菌 的异化类型是需氧型还是厌氧型？
A．经选择培养后将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 B．选择培养这一步可省略，但培养纤维素分解菌少 C．经稀释培养后，用刚果红染色
D．对照组可用同样量的培养液涂布到不含纤维素的培养基上
解析 经选择培养后，再经稀释，才能将样品涂布到鉴别纤
维素分解菌的培养基上；选择培养可省略；经稀释培养后， 用刚果红染色；设置对照能证明经选择培养的确得到了欲分 离的微生物。
解析
该培养基的唯一碳源是纤维素粉，氮源有 NaNO3、酵母膏。
因没有凝固剂成分，因此，该培养基从物理状态上看属于液体培 养基。因该培养基仅以纤维素粉为唯一碳源，因此，可用于选择 培养纤维素分解菌。 答案 (1)纤维素粉 NaNO3、酵母膏 (2)液体 (3)纤维素分解菌
分离土壤中纤维素分解菌实验操作
②选择培养：称取土样20 g，在无菌条件下加入装有30 mL培养基
的锥形瓶中，将锥形瓶固定在 摇床
1～2 d，直至培养液变 混浊
上，在一定温度下振荡培养
。也可重复选择培养。
③挑选菌落
a．刚果红染色法，挑选 产生透明圈 的菌落，一般即为分解纤维 素的菌落。 b．常用的刚果红染色法包括两种，一种是先 培养微生物 ，再加 入 刚果红 进行 颜色 反应，另一种是在 倒平板 时就加入刚