草莓的组织培养一、茎尖1．概述通过对草莓茎尖离体培养的试验研究表明：取草莓茎尖为外植体，以0．35 mm大小为宜；用MS+0.5 mg/L 6-BA+O.2 mg/L NAA培养基．不定芽再生率高；以1/2 MS+O.1 mg/L IBA 生根效果最好。

2.结论（1）再生途径：草莓刚抽出的匍匐茎的茎尖（2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理，最后用无菌水冲洗5～8次，接种于诱导培养基中。

诱导培养基为MS+0．5 mg／L6一BA+0．2mg／L NAA+3 蔗糖(w／v)+0．5﹪卡拉胶，pH值为5.6～5.8。

每个灭菌处理接种2O枚外植体，l5d后观察记录外植体的污染、死亡、无菌成活生长等情况。

（3）培养基：①芽诱导试验，于MS培养基附加0．2 mg／L NAA、IAA、IBA不同种类生长素的培养基中，20d后调查记录幼芽分化情况。

②继代培养与扩大繁殖，MS培养基附加0.5 mg/L6-BA、0.01 mg/L NAA。

③根诱导试验, 用1/2 MS附加不同浓度(mg/I )IBA 有0．05、0．1、0．2、0．5及不加IBA的5个处理.（3）条件：培养基均在1～ 1.1大气压下热压灭菌20min。

培养温度(25±2)℃。

每日光照12h，光强2 000Lux。

（1）再生途径：用其花药、花蕾、叶、叶柄、子叶、下胚轴等作外植体进行离体培养。

（2）灭菌方法：洗去泥土、灰尘，再用自来水冲淋2～3h，置超净工作台上进行75 ﹪乙醇和0．1 升汞不同时间的灭菌处理.（3）培养基：①MS+BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L(浓度单位,下同)；②MS+6一 BA0.5+KT 0.5；③MS+BA2.0+IAA 1.0；④MS+BA2.0+NAA0.5+2,4-D0.1；⑤MS+BA2.0+IBA0.1。

以上培养基各加CH 100 mg/L，蔗糖20g/ L(①为30g/ L)。

①用于花药诱导培养基；②用于花药幺伤组织分化培养；③、④用于其余5种外植体(叶盘、叶柄、下胚轴、子叶、花蕾)诱导培养；⑤仅用于花蕾培养。

（4）条件：培养条件均为12 h光照12 h黑暗。

光强度1200-1500lx、温度(25 ±2)℃。

三、叶片以红颊、章姬、丰香草莓叶片为试材，对影响草莓叶片不定芽再生的主要因素进行了试验研究，建立了草莓离体叶片的再生体系。

试验结果表明，基因型、不同激素种类和配比直接影响了草莓叶片再生芽的发生。

基因型是影响草莓叶片再生能力的决定因素，不同激素配比是不定芽产生的关键因素。

叶片愈伤组织的诱导培养基以MS+TDZ 2~3mg／1较理想，芽伸长的理想培养基为MS+6一BA 0．3～O．5mg／l，生根培养基以1／2MS+IBA0．3mg／1较适宜，移栽成活率可达90％以上。

2.结论（1）再生途径：先采取当年生匍匐茎茎尖培养繁殖，建立起三个品种的无性繁殖系；再从继代3周的无菌苗上剪取叶片作为外植体，进行不同的处理，每瓶接10片叶盘，每处理重复5瓶。

（2）灭菌方法：于121℃下高温高压蒸汽灭菌20min。

（3）培养基：基本培养基为MS培养基。

茎尖培养与组培苗继代培养基为MS+6 一BA0．3～0.5mg/l+蔗糖2Og/l+琼脂7g/l，pH值为5．8，（4）条件：叶片接种在诱导培养基后，直接置于温度为25℃、光照强度为20001x、光周期1 6h的培养条件下。

1、取材。

每年的6-8月，选择植株生长健壮，匍匐茎充实，尖端生长良好，无病虫害的优良植株取其茎尖或花药，作为组织培养的外植体。

2、消毒。

材料取来修整后用纱布包好放在自来水龙头下冲洗2-4小时（以茎尖为例），然后进行表面消毒。

先用70%酒精漂洗半分钟，然后用0.1%的新洁尔灭浸泡15-20分钟，再用0.1%的升汞（氯化汞）消毒5-8分钟，最后用1-2%的过氧乙酸消毒1分钟。

每次都要用无菌水冲洗3-4次后再进行下一次消毒。

整个消毒过程都应在超净工作台内完成。

3、接种。

接种在超净工作台内进行，接种前要先用酒精灯对接种用具（镊子、接种针、接种架等）消毒自然放凉。

先用镊子一层层的剥去茎尖外的幼叶和鳞片，然后在解剖镜下找到生长点（可带1-2个叶原基）用接种针挑出生长点（小于0.5毫米），放入事先准备好的盛有培养基的培养瓶内，封好瓶口，置于培养室内培养成小植株。

4、室内培养。

培养室要求干净清洁，室内装有紫外线杀菌灯，每天要对室内进行消毒，以防污染。

培养温度20-28℃，最适温度25℃，相对湿度70%，光照强度1000-2000勒克斯，每日光照10小时左右。

5、继代培养。

每培养25-30天，培养瓶内的小植株就会分出3-5个小植株，把这些小植株分出放于继代培养基内培养；过20-30天后又会长出小植株，如此反复进行继代培养，增加繁殖系数。

6、诱导生根。

根据生产需要可在1-2月份集中一批苗子生根。

草莓试管苗生根很容易，有的在继代培养基上便可生根。

或者在培养基中加入0.5毫克/升的LBA，经30天左右便可长出6-10条长约2-3厘米的小根。

7、温室驯化。

把生好根的小苗经光照锻炼7-10天，从试管内取出，洗净根部培养基，移栽入事先准备好的营养土内，使其逐渐长大发出5-6片新叶的过程称为驯化。

驯化用的营养土要求土质以疏松的沙土掺入少量有机质。

移栽后要浇透水，支小拱棚覆盖塑料薄膜保湿。

驯化温度以15-20℃，前两周空气相对湿度80-100%，第三周开始短时间放风，放风强度逐渐加大，至移栽后第四周可去掉覆盖物。

根据情况每天或隔天喷水一次，保持土壤湿润而不积水为宜。

驯化一般需2-3个月即可移出。

经病毒鉴定，确认无毒后放入网纱大棚内繁殖。

1.培养基的配制：培养基由植物生长所必需的有机营养成分、微量元素和生长调节剂组成。

首先配制基本培养基，包括微量元素、有机物质、蔗糖(3%)、琼脂(0.6%)等。

为调节被培养物的生长和分化，还需加入细胞分裂素和其他生长素，如6-苄氨基嘌呤(BA)0.25毫克／升、吲哚丁酸(IBA)0.5～1.0毫克／升、GA3(赤霉素)0.1毫克／升等，组成MS培养基。

配好后装入三角瓶或试管，经高压消毒后备用。

2.采取茎苗：在6月份选取刚扎根的匍匐茎苗，对茎苗进行消毒。

消毒方法是，剥去茎苗外面的叶片，用肥皂水洗干净，再用自来水冲洗一小时。

在无菌条件下，用70%的酒精漂洗10分钟后，用5%的次氯酸钠溶液消毒7～8分钟，再用无菌水冲洗5遍，使接种材料无细菌和真菌。

然后在超净工作台上，无菌条件下剥取茎尖生长点0.5毫米，接种到上述已配好的培养基上，每个培养瓶可接种5～7个茎尖。

接种后，在26℃的恒温、光强2000勒[克斯]、每天光照6小时的条件下进行培养。

3.初代培养：对刚接种到培养基上的匍匐茎尖进行培养，使茎尖分生组织分化出芽和无根小植株。

在培养基上加入有利分化的激素，成为分化培养基。

茎尖经30天以上的培养，一个茎尖能分化出数个无根小植株。

4.继代培养：把已分化好的新芽转入到新培养基上，进行继代培养繁殖，使新芽不断增殖，加速生长。

3～4个星期后，可获得30～40个腋芽形成的芽丛，芽丛中有的抽生新茎，并有正常叶片。

经过多次继代培养，使增殖的数量达到一定要求，再把无根苗转入生根培养基上培养，促进生根。

5.生根培养：生根培养时要撤去BA，即去掉了细胞分裂素类的激素，增加生根培养激素，如吲哚丁酸(IBA)等。

生长在这种培养基上的无根植株不再增殖，在每株无根苗基部生出许多不定根，可得到成批完全小植株。

6.移植：在把试管苗种植到土壤里以前，可先将其培养在无菌土壤中，或在盛有由蛀石、草炭、锯末等基质组成的培养土的小塑料盆中进行培养。

培养时，应将试管苗放在温室中，温度保持在20～25℃为宜。

为了保持湿度，以利于试管苗成活，移植后的14天内要用薄膜遮阴，待外界气温适合时，再移植到田间培植。

要注意防治蚜虫等虫害，加强田间水、肥管理，可喷两次50毫克／千克赤霉素，促进抽生匍匐茎。

新抽生的匍匐茎苗为原种苗，经多次、多量繁殖，即可获得成批生产用苗。

组织培养技术1、培养程序和培养基5--6月于晴天的下午在健壮、无病的草莓刚抽出的匍匐茎上取茎尖，大小为0．3--0．4mm，作为组织培养的外植体。

用于草莓茎尖培养诱导芽分化的基本培养基为MS，附加6-BA0．5mg/L，NAA 0．2mg/L，蔗糖30g/L，琼脂粉6．5g／L，pH值调至5．8--6．0。

在草莓茎尖的扩大繁殖阶段，采用MS培养基附加6-BA 0．5mg/L、NAA 0．01mg／L。

扩大繁殖主要是将丛生苗分块即每5--7株切成一块，转入继代培养基。

在转苗过程中，去掉原生叶片有利于新苗分化，在扩大繁殖中随时清除愈伤组织，有利于新苗增殖和生长。

诱导生根培养基用1／2MS附加不同浓度IBA。

试验表明：以IBA 0．1mg／L的浓度处理的生根率最高，为100％，平均根条数为2．4条。

不加TBA及IBA浓度超过0．2mg／L，多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织，随后在愈伤组织上分化生根，致使成活率大大降低。

2、操作技术要点及培养条件(1)灭菌与接种预处理为了灭菌彻底，常把接种材料先进行湿润处理，使灭菌剂能顺利地渗入材料。

可用多种湿润剂，我们采用的是75％的酒精，湿润的时间为半分钟至1分钟。

灭菌处理在草莓组织培养中常用灭菌剂的种类很多。

我们曾用过次氯酸钠10％水溶液(含有效氯0．4--0．5％)，浸泡接种材料10--15分钟；次氯酸钙(漂白粉)，用其饱和上清液，浸泡接种材料15--30分钟；过氧化氢10--12％水溶液浸泡10--20分钟；新洁尔灭5--10％水溶液，浸泡10--15分钟；升汞0．1％水溶液，浸泡8--10分钟。

其中前4种灭菌剂对接种材料比较安全，但因灭菌时间较长，常常使接种材料的外层氧化变褐，以致影响培养效果。

升汞有很强的杀菌能力，但浸泡时间稍长会造成接种材料中毒。

因此，在草莓组织培养中，如把握好时间，升汞是应用较多的灭菌剂。

灭菌后的接种材料，要用无菌水充分清洗，通常要换水3--5次。

接种以培养无病毒苗为主要目的的草莓组织培养，所接种的茎尖材料很小，在接种时首先要求准确熟练地剥取茎尖生长点，并使用固体培养基比较适宜，接种时应注意不能将整个茎尖埋入培养基中。

培养基须用1--1．1大气压热压灭菌20分钟。

从材料接种到生根苗长成，这期间的培养温度一般应稳定在25±2℃。

每日光照12小时，光强以2000Lx为宜。

培养室温度在18--26℃范围内，瓶苗可以正常生长及发根，但在28℃以上时，绿苗普遍变黄，生根率降低，根尖发黄老化，幼苗易产生玻璃化现象。

1、移栽技术试管苗的苗龄为15天，主根长1．5cm左右，白色无须根，移栽成活率可达90％--100％。