血清转氨酶的活性测定
一、实验目的
1、了解分光光度计的使用方法
2、了解血清AL T测定方法的原理
二、实验原理
1、转氨基作用指的是一种氨基酸alpha-氨基转移到一种alpha-酮酸上的过程。

转氨基作用是氨基酸脱氨基作用的一种途径。

其实可以看成是氨基酸的氨基与alpha-酮酸的酮基进行了交换。

结果是生成了一种非必需氨基酸和一种新的alpha-酮酸。

反应由转氨酶和其辅酶磷酸吡哆醛催化。

磷酸吡哆醛是维生素B6的衍生物。

人体内最重要的转氨酶为谷丙转氨酶和谷草转氨酶。

它们是肝炎诊断和预后的指标之一。

2、转氨酶活力的测定AL T作用于丙氨酸及α－酮戊二酸基质，反应生成谷氨酸和丙酮酸，丙酮酸可以与2，4 －二硝基苯肼定量反应生成丙酮酸苯腙，在碱性条件下呈红色，可以用分光光度法定量检测（500nm)。

三、实验器材、试剂
1、仪器723型分光光度计
2、试剂0.1mol/L磷酸盐缓冲液（PH7.4），AL T底物液（含丙氨酸（过量），α－酮戊二酸）、2，4 －二硝基苯肼溶液，0.4mol/LNaOH 溶液，2umol/L丙酮酸标准液。

四、实验步骤
1、标准曲线的绘制
按下表操作
置37℃水浴5min，各管加2，4-二硝基甲苯溶液1ml，混匀，再在37℃水浴放置20min，各管加0.4mol/L氢氧化钠2ml，混匀，10min 后，以对照组调零测A500.以各管吸光度为横坐标，以相应的ALT单位为纵坐标绘制标准曲线。

3、血清ALT的测定
按下表操作
置37℃水浴20min，各加入0.4mol/L的氢氧化钠2ml，混匀，10min 后，以对照组调零，测A500。

并在标准曲线上查ALT活力单位。

五、实验数据级结果
1、数据记录
标准曲线如下图
2、按照标准曲线查出样品的酶活力单位数为1.97U.
思考题
血清AL T活力测定时，对照管也加入了相应体积的血清，为什么这样做？
答:血清中即使不加入ALT底物，其中也有成份可以与2，4－二硝基苯肼作用，生成物在碱性条件下呈红棕色。

对照组加入血清正是为了消除这部分误差。