试剂盒的组成
TMB H2O2
试剂基本成分
洗涤缓冲液（pH7.4 PBS）： KH2PO4、Na2HPO4·12H2O、NaCl、KCl、0.05% Tween-20 稀释缓冲液 洗涤缓冲液+1%的牛血清蛋白 终止液 强酸/强碱
其他酶联免疫分析方法
化学发光酶联免疫分析 以发光剂作为酶免疫测定的底物，通过测定发光反应光强度 的敏感性检测标本中抗原或抗体的含量。
常用酶
酶 辣根过氧化物酶 碱性磷酸酯酶 β-D-半乳糖苷酶
底物
邻苯二胺 OPD
四甲联苯胺 TMB
对硝基磷酸苯酯 PNP
邻硝基苯-β-D半 乳糖苷 ONPG
显色反应 橘红色
测定波长 /nm
492
黄色
450
黄色（对硝基 苯酚）
405
黄色（邻硝基 苯酚）
405
双抗夹心法
固
封
相
板
载
蛋பைடு நூலகம்
体
白
抗
抗
体
原
酶
标
底
抗
荧光酶联免疫分析 在酶联免疫中引入荧光底物，此类底物被酶分解后，其产物 可产生荧光。
电化学酶联免疫分析 酶催化底物发生相应的水解、氧化、或还原反应，产生或消 耗一种电化学活性物质，再用适当的电化学技术进行检测。
Thanks for your attention
物
体
间接法
固
封
相
板
载
蛋
体
白
抗
抗
体
原
酶
标
底
抗
物
抗
体
竞争法
固
封
相
板
载
蛋
体
白
抗
抗
体
原
酶 标
底
抗
物
原
三抗夹心法
固
封
相
板
载
蛋
体
白
抗
抗
体
原
酶
标 抗 抗
底 物
体
抗酶抗体法
固封 相板 载蛋 体白
第
第
第
抗
一
原
抗
三 抗
二 抗
酶
底 物
体
体
体
A种动物
B种动物
ELISA的应用
临床医学、动植物检验检疫、出入境检验检疫、 食品科学、转基因产品、药物残留、病虫害防治
固相载体
吸附性能好，空白值低，板底透明度高 ，各板之间、同一板各孔之间性能相近 聚苯乙烯 微量反应板（8 × 12/96孔）、小珠 包被&封闭
包被：pH9.6的碳酸盐缓冲液稀释 封闭：0.05%—0.5%牛血清蛋白
戊二醛交联法
4-40℃范围，pH6.0-8.0
过碘酸盐氧化法
只适用与含糖量较高的酶——辣根过氧化物酶（HRP）
Schematic representation of the cascaded hybridization chain reaction for amplified miRNA sensing
ELISA原理
必要试剂： ① 免疫吸附剂：固相的抗原或抗体 ② 结合物：酶标记的抗原或抗体 ③ 酶反应的底物
酶
酶的要求： ① 纯度高，专一性强，催化反应效率高 ② 具有足够多的偶联用标记基团，用各种化学方法与抗原、抗
体偶联结合后，仍保持较高的催化活性 ③ 使用稳定性和保存稳定性好 ④ 待测液中不存在与标记酶相同的酶、底物、反应抑制剂等干
扰物质 ⑤ 测定酶活性的方法简便、灵敏、快速 ⑥ 酶的来源、纯化和供应较方便
光度酶联免疫吸附分析 ELISA
邹腊娜
2016.11.30
概述
ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay）法 ，即酶联免疫吸附分析，是由Engvall和Perlmann 及van Weeman 和Schuurs同时建立起来的。
抗原&抗体
完全抗原 半抗原
特异性 可逆性