毕业论文实验步骤(批改稿)
————————————————————————————————作者：————————————————————————————————日期：
柳州职业技术学院
毕业设计
题目：不同温度和PH培养条件下对枯草杆菌的提纯优化
姓名：雷小兵
学号：20093005032
专业：食品检测及管理
年级：2009级
时间：2011年11月
指导老师：覃俊达
实验合作者：杨梅娟
时间：2011年11 月
柳州职业技术学院毕业设计（论文）
任务书
基础部系（部）食品检测及管理专业 2 班学生雷小兵学号 20093005032
一、毕业设计（论文）题目：不同温度和PH培养条件下对枯草杆菌的提纯优化
二、毕业设计（论文）工作规定进行的日期：200 年月日起至 200 年月日
三、毕业设计（论文）进行地点：学校图书馆上网查资料
四、任务书的内容：
目的：
通过此次实验对枯草杆菌有了一个深入的理解，懂得如何根据实际情况培养得出纯种枯草杆菌，会科学地挑选生长环境因素，并在此基础
上进行实验，得出结论，找出最佳生长环境，写出对结果的分析。
任务：
（1）上图书馆查阅微生物方面的科学杂志30-40篇，记录各篇论文的作者、题目、杂志名称、出版地点、时间及页码（如有摘录千万不能
弄错是从哪篇文章摘录的）
（2）确定一篇论文作为自己的研究起点，查阅该篇论文的参考文献，理出该研究的前因后果
（3）依据上述工作确定自己的课题，选择合适的实验设计方案
（4）填入模拟数据，进行模拟分析
不同温度和PH培养条件下对枯草杆菌的提纯优化
摘要】：本文根据实验操作,针对枯草杆菌生长环境的选着，通过对培养基的PH值、生长温度的选择进行实验研究,得出最佳的生长环境。
绪论：枯草杆菌是非致病菌细菌，对人畜无害，不污染环境，是好氧的阳性菌，①而且很多学者的研究证明动物饲喂芽孢杆菌后，能显著降低肠道大肠杆菌、产气荚膜梭菌、沙门氏菌的数量，使机体内的有益菌增加而潜在的致病菌减少，因而排泄物、分泌物中的有益菌数量增多，致病性微生物减少，从而净化了体内外环境，减少疾病的发生。
氨、胺、吲哚、硫化氢等物质在肠道粘膜对细胞有明显的毒害作用，芽孢杆菌抑制了有害微生物，进而减少有害物质产生，有利于动物健康和生长。
②根据（士论文-枯草芽孢杆菌XM16菌株抗真菌蛋白的分离纯化及性质结构研究）中所说‘经过 100℃热处理 30min，活性未丧失’可知枯草杆菌是十分耐高温的，以此对样品经行预处理。
所以本实验以土壤中的枯草杆菌为对象,观察不同温度和PH值对枯草杆菌的生长的影响。
从而得到适合枯草杆菌生长的最佳条件。
实验阶段：
一、准备实验：
1、①仪器：恒温培养箱2个、培养皿27个、20ml的吸量管1支、2ml 的吸量管4支、干燥箱、高压灭菌锅、水浴锅、250ml的烧杯3个、（制作培养基）250ml的锥形瓶3个、200ml的锥形瓶1个、（废液）洗耳球1个、试管架1个、酒精灯1个、打火机1个、75%的酒精、200ml的试剂瓶电炉1个、3支1ml的吸量管
②药品：蛋白胨、牛肉膏、Nacl、琼脂、硫酸、氢氧化钠
2、玻璃仪器的灭菌：将所需的玻璃仪器洗净，用报纸包好，放到干燥箱125℃灭菌4h。
3、取样：取土壤表层5-10cm下的肥土100g左右，把采得的土壤放入纸袋带回实验室分离。
4、样品处理：称取肥土5g放入含有45ml水的锥形瓶中，摇动片刻，然后将此瓶在无菌实验室中用小火加热至悬浊液沸腾，维持15min。
而后静置5min。
5、培养基的配制：
①取蛋白胨2g、牛肉膏0.6g 、Nacl 1g 、琼脂3~4g 于250ml的烧杯中，
加入200ml的且PH4的蒸馏水，溶解，倒入锥形瓶中。
②取蛋白胨2g、牛肉膏0.6g 、Nacl 1g 、琼脂3~4g 于250ml的烧杯中，加入200ml的且PH6的蒸馏水。
溶解，倒入锥形瓶中。
③取蛋白胨2g、牛肉膏0.6g 、Nacl 1g 、琼脂3~4g 于250ml的烧杯中，加入200ml的且PH8的蒸馏水。
溶解，倒入锥形瓶中。
6、生理盐水的配制：称取0.85g的食盐200ml的烧杯中溶解，移入100ml 的试剂瓶中。
7、湿热灭菌：用棉花塞好装有培养基的3个锥形瓶和装有生理盐水的试剂瓶的瓶口，用报纸包好瓶口。
放入高温灭菌锅121℃灭菌20min。
8、无菌室的灭菌：将实验服挂于无菌室，打开无菌操作台的紫外光灯，再打开无菌室的紫外光灯，灭菌1h，在做实验前半小时关闭。
二、实验操作：
1、进入无菌室，用75%的酒精擦拭双手，穿上灭过菌的实验服，将所需玻璃仪器和培养基放入无菌操作台，点上酒精灯。
2、吸取2ml样液到1号试管中，再吸取20ml无菌生理盐水到该试管，摇匀，即为10-1 。
吸取1号试管的样液2ml到2号试管中，再吸取20ml无菌生理盐水加到该试管，摇匀，即为10-2。
同方法制作10-3于3号试管中。
3 、①取PH4的培养基分别倒20ml平铺于3个培养皿中。
吸取1号试管中样液1ml，放入培养皿，使样液平铺于培养基上。
吸取2号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。
吸取3号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。
②取PH6的培养基分别倒20ml培养基于3个培养皿中。
吸取1号试管中样液1ml，放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。
吸取2号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。
吸取3号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。
③取PH8的培养基分别倒20ml培养基于3个培养皿中。
吸取1号试管中样液1ml，放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。
吸取2号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。
吸取3号试管中的样液1ml, 放入培养皿，使样液平铺于培养皿上。
④将这9个培养皿倒置于20℃的恒温培养箱中培养24h、36h、48h。
分别计数。
⑤以3的方法做两组实验，分别倒置于37℃、42℃的恒温培养箱中培养24h、36h、48h分别计数。
三、数据记录（注：每个梯度只根据PH值和温度比较。
PH4的培养基不凝固）
培养皿典型菌落数（杂菌菌落数）10-1记录表1
20℃37℃42℃
24H 36H 48H 24H 36H 48H 24H 36H 48H
PH6 未生
长未生
长
未生
长
未生
长
未成
长
未生
长
边缘少
量生长
少量
生长
少量
生长
PH8 未生
长未生
长
未生
长
片状
略大
片状
大
片状
很大
片状略
大
片状
略大
片状
略大培养皿典型菌落数（杂菌菌落数）10-2记录表2
20℃37℃42℃
24H 36H 48H 24H 36H 48H 24H 36H 48H
PH6 未生
长未生
长
未生
长
小片
状
片状略
大
片状大小片
状
片状略
大
片状略
大
PH8 未生
长未生
长
未生
长
片状
大
片状略
大
片状很
大
小片
状
片状略
大
片状略
大培养皿典型菌落数（杂菌菌落数）10-3记录表3
20℃37℃42℃
24H 36H 48H 24H 36H 48H 24H 36H 48H
PH6 未生
长未生
长
未生
长
小片
状
片状略
大
片状大小片
状
片状略
大
片状
略大
PH8 未生
长未生
长
未生
长
小片
状
片状大片状很
大
小片
状
片状略
大
片状
略大
四、结果讨论：
1、从表1、
2、3可以看出，在20℃的温度下，PH6和PH8的培养基中的枯草杆菌都是不生长的。
所以在20℃的温度下，枯草杆菌难以生长。
2、从表1、2、3可以看出，在37℃的温度下，PH6和PH8的培养基中的枯草杆菌都以上升的趋势生长。
表明37℃对枯草杆菌的生长适合。
3、从表1、2、3可以看出，在42℃的温度下，PH6和PH8的培养基中的枯草杆菌在36h之前都以上升的趋势生长，但在36h到48h这段时间却变化不大，停滞生长。
表明短时间内，能缓慢生长，时间稍长就会出现停滞生长的现象。
4、经过比较，在同一时间、同一温度下，PH8条件下的枯草杆菌都比PH6条件下的生长的好，即在同一时间里PH8条件下的枯草杆菌生长状态和速度都比PH6的好。
表明在PH8比较适合枯草杆菌的生长。
五、得出结论：
PH8和37℃的温度下，枯草杆菌生长的比较迅速，旺盛。
参考文献：
[1]、枯草芽孢杆菌6—磷酸葡萄糖脱氢酶的分离纯化和部分性质莫宏春
[2]、枯草芽孢杆菌拮抗致病微生物，改善体内外生态环境(2010-08-28
[3]、硕士论文-枯草芽孢杆菌XM16菌株抗真菌蛋白的分离纯化及性质结构研究生物农医2011-8-10 23:50:53。