关于不同细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒的比较和选择（碧云天）C0009 C0036 C0038产品名称MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒Cell Counting Kit-8检测样品数500 500 500 价格228.00元458.00元568.00元主要用途细胞增殖及细胞毒性检测细胞增殖及细胞毒性检测细胞增殖及细胞毒性检测形成的formazan的水溶性差好好检测灵敏度高很高最高检测时间较长较短较短检测波长560-600nm 420-480nm 420-480nm细胞毒性高，细胞形态完全消失很低，细胞形态不变很低，细胞形态不变试剂稳定性一般较好很好大批量样品检测可以非常适合非常适合便捷程度一般比较便捷非常便捷如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求不是很高，从经济角度可以选择C0009，即MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒。

C0009可以满足常规的细胞增殖或细胞毒性的检测，主要缺点是形成的formazan水溶性很差，需要额外的步骤溶解formazan。

如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求灵敏度非常高，并且希望非常便捷，在研究经费许可的条件下，建议选择使用C0038，即Cell Counting Kit-8。

如果既希望检测灵敏度很高并且检测比较便捷，但又希望价格不是太贵，可以选择C0036，即WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒。

MTT的替代产品—XTT，WST-1，CCK-8（WST-8）（生物吧）1、MTT法MTT：化学名： 3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝。

检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。

二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲臜，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。

它的特点是灵敏度高、经济。

缺点：由于MTT经还原所产生的甲臜产物不溶于水，需被溶解后才能检测。

这不仅使工作量增加，也会对实验结果的准确性产生影响，而且溶解甲臜的有机溶剂对实验者也有损害。

2、XTT法XTT：化学名：2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]-2H-tetrazolium hydroxide，作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色甲臜产物。

当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的甲臜产物的吸光度与活细胞的数量成正比。

优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT。

缺点：XTT水溶液不稳定，需要低温保存或现配现用。

3. WST-1WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考图1)。

细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

WST-1是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。

首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-1和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。

其次，WST-1产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。

再次，WST-1比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。

另外，WST-1和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高4、CCK-8法或称WST-8法CCK-8试剂中含有WST–8：化学名：2-（2-甲氧基-4-硝基苯基）-3-（4-硝基苯基）-5-（2，4-二磺酸苯）-2H-四唑单钠盐，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞线粒体中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲臜产物（Formazan）。

生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。

用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。

该方法已被广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞增殖试验、细胞毒性试验以及药敏试验等。

优点：1、使用方便，省去了洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；2、检测快速；3、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度；4、重复性优于MTT；5、对细胞毒性小；6、为1瓶溶液，毋需预制，即开即用。

缺点：1、与MTT相比，CCK-8和XTT的价格比较贵。

2、CCK-8试剂的颜色为淡红色，与含酚红的培养基颜色接近，不注意的话容易产生漏加或多加。

WST-1产品简介：WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(WST-1 Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)是一种广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。

WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1)。

细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

WST-1是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS 等相比有明显的优点。

首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-1和XTT、MTS产生的ormazan 都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。

其次，WST-1产生的formazan比XTT 和MTS产生的formazan更易溶解。

再次，WST-1比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。

另外，WST-1和MTT、XTT等相比，线性范围更宽，灵敏度更高(参考图2)。

本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测等。

本试剂盒检测非常便捷。

无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。

不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外步骤去溶解formazan。

可以用于大批量样品的检测。

酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。

WST-1对细胞无明显毒性。

加入WST-1显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。

如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求不是很高，从经济角度可以选择BC0009，即MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒。

BC0009可以满足常规的细胞增殖或细胞毒性的检测，主要缺点是形成的formazan水溶性很差，需要额外的步骤溶解formazan。

如果对细胞增殖或细胞毒性的检测要求灵敏度非常高，并且希望非常便捷，在研究经费许可的条件下，建议选择使用BC0038，即Cell Counting Kit-8。

如果既希望检测灵敏度很高并且检测比较便捷，但又希望价格不是太贵，可以选择BC0036，即WST-1细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒。

本试剂盒可以测定500个样品。

包装清单：保存条件：-20℃避光保存，一年有效。

WST-1粉末溶解后，4℃避光可以保存一周，-20℃避光可以保存半年(宜适当分装，尽量避免反复冻融)。

注意事项：由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，一定要注意蒸发的问题。

一方面，由于96孔板周围一圈最容易蒸发，可以采取弃用周围一圈的办法，改加PBS，水或培养液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培养箱内水源的地方，以缓解蒸发。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：1. WST-1溶液的配制：把5毫升电子耦合试剂加入到WST-1粉末中，完全溶解即成WST-1溶液。

WST-1溶液4℃避光可保存一周，而不影响使用效果。

短期内不使用的WST-1溶液，分装后可以-20℃避光保存半年(尽量避免反复冻融)。

冻存的WST-1溶液溶解后可能会观察到一些沉淀物，这是正常现象，37℃水浴孵育2-10分钟，通常可以完全溶解。

2. 通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。

按照实验需要，进行培养并给予0-10微升特定的药物刺激。

3. 每孔加入10微升WST-1溶液。

如果起始的培养体积为200微升，则需加入20微升WST-1溶液，其它情况以此类推。

可以用加了相应量细胞培养液和WST-1溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。

4. 在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况，孵育1-2小时就可以了。

时间长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。

图3为HT-1080细胞在不同时间测定的细胞数量曲线。

5. 把96孔板置于摇床上摇动一分钟，以充分混匀待检测体系。

6. 在450nm测定吸光度。

如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。

可以使用大于600nm的波长作为参考波长进行双波长测定。

Cell Counting Kit-8试剂盒产品简介：Cell Counting Kit-8（CCK-8试剂盒）是检测细胞增殖、细胞存活和细胞毒性的试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用快速高灵敏度检测试剂盒，为MTT法的替代方法，试剂盒中采用水溶性四唑盐-WST-8，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan(参考图1)。

细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

图1. WST-8化学结构和反应原理图(EC=electron coupling reagent，即电子耦合试剂)WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。

首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。

其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。

再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。