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血清总胆固醇的测定和血清蛋白分离实验

血清总胆固醇的测定
实验目的:
测量血清中总胆固醇的含量
实验原理:
胆固醇酯加水在胆固醇酯酶的催化下生成游离胆固醇和脂肪酸。

游离胆固醇加氧在胆固醇氧化酶作用下生成胆烷4-烯-3-酮和过氧化氢,过氧化氢再加4-氨基安替比林和酚在过氧化物酶的作用下生成醌亚胺,醌亚胺在500nm 有特异吸收峰,吸收的强度与胆固醇含量成正比。

反应如下:
胆固醇酯+H 2O 胆固醇酯酶
→ 游离胆固醇+脂肪酸
游离胆固醇+O 2 胆固醇氧化酶→ 胆烷-4-烯-3-酮+H 2O 2
H 2O 2+4-氨基安替比林+酚过氧化物酶→ 醌亚胺染料+H 2O 实验操作:
取干净干燥的小试管3支,标号,按下表操作
混匀,置37℃水浴5-6分钟,以空白管校零,在500nm 波长下比色读取各管吸光度。

实验结果:
As= 0.214 A T =0.143
标准管胆固醇含量mmol/L=5.00mmol/L
测定管胆固醇含量mmol/L=3.34mmol/L
分析讨论:
为保证实验结果准确,滴加液体时可以先滴加量少的液体,再滴加含量较大的
血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
实验目的:
醋酸纤维薄膜电泳把血清蛋白分离,并测定血清蛋白种类
实验原理:
带电颗粒在电场作用下,向着与其所带电性相反的电极移动,称电泳。

醋酸纤维薄膜电泳可把血清
蛋白分离为:清蛋白、α
1、α
2
、β、γ-球蛋白5条区带
实验操作:
1.点样:取在缓冲液中浸泡的醋酸纤维薄膜一条(
2.5×8cm),轻轻夹于滤纸中,吸去多余的缓冲液,在薄膜的毛面上距一端约1.0cm~1.5cm处,用点样气沾上血清后迅速压一下,然后将毛面向下使两端紧贴在四层滤纸上,加盖,平衡2~3分钟,通电电泳。

2.电泳:恒压120V,0.6mA/cm,时间50~60分钟。

3.染色:电泳完毕后,关闭电源,将薄膜取出,直接浸入氨基黑染色液中染色,取出用漂洗液浸洗3~4次,至背景完全无色为止。

实验结果:
电泳后出现5条区带,从正极到负极,分别为清蛋白、α
1、α
2
、β、γ,点样线。

分析讨论:
在醋酸纤维薄膜上点血清时要在毛面上点样,点样时要快速且血清量不能过多或者过少。

电泳时把点样端放在电泳负极处。

染色时间不能过短否则会导致最后得到的结果不够明显。

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