切胶回收的步骤
精品资料
切胶回收的步骤
1.琼脂糖凝胶电泳目的基因,紫外灯下切除含有目的基因的琼脂糖,用纸巾吸尽凝胶表面的液体,尽量减少不含目的基因的凝胶量,称重(1mg=1ul)
2.尽量切碎凝胶
3.向离心管中加入3倍体积的NAL溶液, 55(视具体胶定)度加热,使凝胶完全融化,
4.按每20ul硅胶树脂结合(树脂使用前要充分混匀)约3ugDNA加入适量比例的硅胶树脂,充分混合,室温放置20min,
5.10000rpm离心1分钟,去上清(上清液暂保存,如回收率不过可重复4)
6.加入800ul清洗液(清洗液加入56ml100%的无水乙醇),振荡混匀后,室温静置10min,10000rpm离心1分钟,去上清
7.重复步骤6,尽量去除上清,完全风干至不残留乙醇味道;
8.加入和硅胶树脂等体积的TEbuffer或灭菌蒸馏水混匀,55度水浴20min 9.10000rpm离心1分钟,吸上清为DNA回收液,
10.重复8,9
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