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小鼠肝脏取材固定方法

小鼠肝脏取材固定方法
试剂:
小鼠麻醉剂:4%水合氯醛,
肝脏固定液:4% PFA
器材:手术器械(剪刀,镊子),1 mL注射器
称取小鼠体重,记录体重值。

腹腔注射4%水合氯醛麻醉小鼠(20 μL/10 g 体重),2-3 min 后,用镊子捏小鼠四肢失去反应时,大头针固定解剖盘(塑料泡沫盒)中。

剪断下腔静脉,充分放出血液,用吸水纸吸干流出的血液。

用镊子捏住边缘膜系结构完整剪下整个肝脏,不要破坏组织结构,放入10cm 培养皿中,称量记录肝脏重量值。

取肝脏中叶分成50 mg左右的小块,放入冻存管中,立即放入液氮中速冻30 分钟,每个肝脏冻存多份,转移至-80℃冻存用于提取蛋白质和RNA。

取中叶的同时,取小鼠肝脏左右两叶肝片,放入盛有4% PFA 的50 mL离心管中固定。

摇床上固定8-12小时(过夜)。

固定液体积至少是组织块的体积的10倍,室温固定。

固定结束,用1x PBS摇床上洗3次,每次10 min,除去组织残留的固定液。

然后保存于70% 乙醇,4℃,可保存2周。

取材中小鼠编号,冻存管编号,50 mL离心管编号要完全一致,不可混淆。

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