1 材料与方法
1. 1 田间试验 田间试验于 2002年 9～11月 、2003年 9～11月
进行 。试验地点安排在浙江省衢州市郊 、广西区南 宁市郊和桂林市郊 。试验农药为 50%多菌灵可湿 性粉剂 (由杭州大地农药股份有限公司提供 ) ,供试 作物为 柑 ,树龄 5年 。最终残留试验 :按在柑橘上 推荐使用剂量即 50%多菌灵可湿性粉剂 1 000倍和 高剂量 (500倍 )水稀释液喷雾施药 。第一次施药在 柑橘果采摘前 2 个月左右进行 ,以后每隔 7 d施药 一次 ,共施药 3次和 4 次 ,距最后一次施药 20 d和 30 d时分别取上中下及里外 5点的橘子样品和土壤 进行检测 。降解动态试验 :按高剂量 ( 500 倍液 )施
多菌灵 [ carbendazim , N - ( 2 - 苯并咪唑基 )氨 基甲酸甲酯 ]又叫苯并咪唑 44 号 、棉萎灵等 ,是一 种广谱内吸性杀菌剂 ,能防治水稻 、棉花 、蔬菜 、果树 等多种作物的多种病害 ,尤其对子囊菌和半知菌引 起的病害有较好的防治效果 [ 1 ] ,但它的残效期比较 长 ,对哺乳动物有一定的毒性 [ 2 ] 。因此 ,农产品中 多菌灵残留量的测定越来越受到重视 [ 3～8 ] 。目前有 关多菌灵在柑橘上的残留研究尚未见报道 。本试验 研究了多菌灵在柑橘及橘园土壤中的残留与降解 特性 。
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菌灵 在 不 同 样 品 中 的 添 加 回 收 率 在 80. 1% ～ 105. 4%之间 ,变异系数最大为 5. 5% (表 1) 。
表 1 多菌灵残留分析方法添加回收率
添加浓度 (mg / kg)
0. 01 0. 1
1 5
土 壤
回收率 ( % ) ( x ±s) —
87. 0 ±2. 12 88. 9 ±3. 18 82. 7 ±2. 70
变异系数 (%) —
2. 44 3. 58 3. 26
全 果
回收率 ( % ) ( x ±s) —
90. 7 ±2. 76 80. 1 ±4. 17 88. 0 ±1. 87
变异系数 (%) —
3. 04 3. 80 2. 13
果 肉
回收率 ( % ) ( x ±s)
105. 4 ±5. 80 86. 3 ±2. 33
施药 浓度 (稀释 倍数 )
施药 次数 (次 )
取样 时间
( d)
广西 , 2002 土壤 果皮 果肉
残留量 (mg / kg)
广西 , 2003
浙江 , 2002
土壤 果皮 果肉 土壤 果皮 果肉
1 000
3
20 0. 992 4. 470
30 0. 208 2. 549
4
20 2. 110 5. 409
收稿日期 : 2004 - 09 - 30 项目来源 :农业部农药检定所委托项目 ;浙江省教育厅资助项目 (编
号 : 200302532) 。 作者简介 :金仁耀 (1981—) ,男 ,浙江遂昌人 ,硕士研究生 ,从事农药
残留分析的研究工作 。 Tel: ( 0571) 86971220; E - mail: gwj7701 @ 163. com。
30 0. 352 3. 462
500
3
20 3. 013 11. 513
30 0. 706 7. 140
4
20 4. 346 14. 499
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江苏农业科学 2005年第 2期
在国际型振荡器上振荡提取 2 h,用布氏漏斗抽滤 , 以 50 m l甲醇洗残渣 ,合并滤液于 250 m l平底烧瓶 中 ,在 40 ℃水浴上减压浓缩至 40～50 m l,留待液 液分配 。将浓缩后的提取液转移至 500 m l分液漏 斗中 ,加入 20 m l 0. 1 mol/L 的盐酸溶液和 100 m l 10%NaCl溶液后 ,再加入 50 m l石油醚剧烈振荡 1 m in,静置 分层后 , 弃 去石 油醚 层 。下层 水 相 用 2 mol/L NaOH 溶液调节 pH 值至 6. 5,再用二氯甲烷 萃取 3次 ,每次 40 m l。经无水 Na2 SO4 干燥 ,合并二 氯甲烷于 250 m l平底烧瓶中 ,减压浓缩至近干 ,再 用氮气吹干 ,以 N , N - 二甲基甲酰胺定容至 5 m l。 (2)柑橘 (橘皮 、果肉和全果 ) :称取 20. 0 g (精确至 0. 01 g)捣碎的样品 (果肉为 50. 0 g)于 250 m l具塞 三角瓶中 ,加入 80 m l甲醇和 20 m l 0. 1 mol/L 的盐 酸溶液 ,再按土壤样品的处理方法处理 。
药 1次 ,每个处理 3次重复 ,每小区 2株 。施药后当 天 (叶上药液干后 )及间隔一定的时间 ( 1 d、3 d、7 d、14 d、28 d、45 d)分别取上中下及里外 10个橘子 样品及土壤进行检测 。浙江试验点为壤土 , pH 值为 6. 5,广西试验点为沙质红黄壤 , pH值为 6. 3。 1. 2 分析方法 1. 2. 1 仪器与试剂 仪器 : HP1100 液相色谱仪 (带 DAD 检测器 ) ,色谱工作站 ,国际型振荡器 、旋 转蒸发仪 ( 2FG - 85A 型 ) 。试剂 : 甲醇 、二氯甲烷 、 石油醚 、盐酸 (均为 A. R. 级 ) ; 无水硫酸钠 (A. R. 级 ,用前在马福炉中 600 ℃灼烧 4 h) ; 甲醇 (色谱 纯 ) ;乙腈 (色谱纯 ) ;水 (二次重蒸 ) ; N , N - 二甲基 甲酰胺 (重蒸 ) 。多菌灵标样 :已知含量 , ≥ 99. 0%。 1. 2. 2 色谱操作条件 色谱柱 :Φ4. 6 mm ( id) × 100 mm , TRACE EXCEL 120 ODS - C18 不锈钢柱 , 粒径 5 μm。流动相 :采用甲醇 、乙腈和 0. 1% 磷酸 水缓冲液梯度淋洗 : 0 m in,甲醇 100% ; 4 m in,甲醇 10% ,乙腈 20% ,缓冲液 70% ; 6 m in,甲醇 100% ;停 止时间 10 m in。流速 : 0. 8 m l/m in。检测波长 : 281 nm。进样量 : 20 μl。多菌灵相对保留时间 : 约 5. 5 m in;典型色谱图见图 1～4。 1. 2. 3 标准溶液的配制 准确称取 0. 01 g (精确至 0. 2 mg) 多菌灵标准品 , 置于 10 m l容量瓶中 , 以 N , N - 二甲基甲酰胺溶解并定容至刻度 ,摇匀后即 为标准母液 。从上述标准母液中准确吸取 1 m l于 25 m l容量瓶中 ,以 N , N - 二甲基甲酰胺稀释至刻 度 ,摇匀 ,再从中准确吸取 1 m l于 10 m l容量瓶中 , 以 N , N - 二甲基甲酰胺稀释至刻度 ,摇匀 ,备用 。 1. 2. 4 样品的前处理 ( 1)土壤 :称取制备好的土 样 20. 0 g (精确至 0. 01 g)于 250 m l具塞三角瓶中 ,
加入 80 m l甲醇和 20 m l 0. 1 mol/L 的盐酸水溶液 ,
2. 2 方法回收率 取制备好的空白对照样品 20. 0 g (柑橘果肉为
50. 0 g) ,加入一定量的多茵灵标准品 ,按上述方法 对样品进行提取 、净化 、测定后 ,计算添加回收率 ,多
金仁耀等 :多菌灵在柑橘和土壤中的残留及降解动态研究
相关系数 半衰期
R2
T I/2 ( d)
0. 937 6 2. 59
0. 934 7 3. 65
0. 982 9 13. 95
0. 901 9 8. 15
0. 976 5 2. 26
0. 936 4 1. 39
0. 952 6 34. 48
0. 771 0 19. 69
表 3 多菌灵在柑橘上的残留试验结果
2 试验结果
2. 1 标准曲线 采用 外 标 法 定 量 , 将 多 菌 灵 的 标 准 母 液 用
N , N - 二甲基甲酰胺稀释成 0. 1～100 mg /L 的标准 溶液 。在上述色谱操作条件下 ,测定了 HPLC /DAD 对多菌灵响应的线性关系 (图 5) 。检测线性范围为 1～2 000 ng,其线性回归方程式为 y = 3. 3548x + 86. 653,相关系数 r = 0. 999 6, 最低检出量 : 1. 0 × 10 - 10 g;按上述方法 ,以土壤称样 20 g,定容 10 m l, 果肉 50 g,定容 10 m l,果皮 10 g,定容 10 m l,计算实 测最小检测浓度分别为 : 土壤 0. 025 mg / kg; 果肉 、 果皮 0. 01 mg / kg。
江苏农业科学 2005年第 2期
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多菌灵在柑橘和土壤中的残留及降解动态研究
金仁耀 1 , 桂文君 2 , 寿林飞 2 , 吴慧明 2 , 朱国念 2
(1. 浙江大学原子核农业科学研究所 ,浙江杭州 310029; 2. 浙江大学农药与环境毒理研究所 ,浙江杭州 310029)
摘要 : 用稀盐酸和甲醇混合溶液提取柑橘和土壤样品中的多菌灵 ,并采用液相色谱法测定了样品中多菌灵 的残留量 。检测方法的最低检测浓度 :土壤 0. 025 mg/ kg;果肉 、果皮和全果 0. 010 mg / kg。添加回收率在 80. 1% ～105. 4%之间 ,符合农药残留分析要求 。田间降解动态试验结果表明 ,多菌灵在柑橘中降解较土壤中缓慢 ,半衰 期可达 35 d。按推荐用药量施药 ,对于橘肉使用是安全的 。 关键词 : 多菌灵 ; 柑橘 ; 土壤 ; 残留 ; 降解 中图分类号 : S481 + 18 文献标识码 : A 文章编号 : 1002 - 1302 (2005) 02 - 0111 - 04
测定收获的橘果 (果皮和果肉 )及土壤 ,结果
(表 3)表明 :残留量与施药水平呈正相关 。其中土 壤和橘皮中的残留量较高 ,施药后 30 d采收的样品 中 ,多菌灵最高残留量仍分别有 2. 74 mg / kg (浙江 , 2002)和 17. 19 m g / kg (广西 , 2003 ) ,但是果肉中的 残留量 却 明 显 低 于 土 壤 和 橘 皮 , 最 高 仅 为 0. 36 mg / kg (浙江 , 2样品名称 地点 年份