POD检测方法
(Horseradish Peroxidase)
1原理
Purpurogallin的产生可以通过420nm的光吸收进行检测。
2试剂:
A.5.0%焦酚溶液
B.0.5% 过氧化氢(H2O2)溶液
C 酶稀释液:100mM PB 缓冲液, pH6.0
3 操作规程:
3.1仪器参数设定
检测方法:时间扫描
测量波长:420nm 系数/因子:2.5 测量温度:20±0.5℃
3.2 样品准备
若待测样品为固体,可以按10mg 样品/1000ul 超纯水比例溶解。
溶解后于2-8度放置30min。
3.3 检测方法
3.3.1在石英比色皿中加入525ul水,80ul试剂A, 40ul试剂B,80ul 试剂C于20度孵育
2min。
3.3.2加入25 ul 样品后, 温和混匀后开始测定。
3.3.3 测定结束后,每隔20秒计算△OD,取△OD最大值
3.3.4 活性值(U/ml)范围为0.3-0.7U/ml,若超出范围,待测样品需经试剂C稀释后再次
进行检测。
3.3.5测定样品前需检测空白反应值,即其他操作不变,用25ulC代替样品,测定OD blank。
3.3.6计算公式
活性(U/ml)。