醇类
酸类 聚合物
山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等
柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等
疫苗冻干保护剂组成
1. 营养液： • 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分；
• 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状，
增加溶解度 2. 赋形剂： • 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响 • 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度 3. 抗氧化剂： • 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存
注意事项：
① 氢氧化铝吸附力较强，所以要用软化水或去离子水洗涤。 ② 氢氧化铝胶为两性化合物，过酸或过碱都会失去胶态。故要
掌握好化合时的pH值。
③ 贮存铝胶应放在耐酸搪瓷缸或耐酸池中，严密封盖，贮放期不超过3个月。 ④ 铝胶室温保存，以免破坏胶态。
油乳佐剂
是指一类由油类物质和乳化剂按一定比例混合形成的佐剂。 该类佐剂主要在抗原寻的过程中起作用，使抗原在注射部位保 持稳定，为抗原在淋巴系统中转运提供载体，增加单核细胞的 形成和积聚。 油水乳剂疫苗的免疫效力高低，直接与乳化作用的好坏和乳剂 成分的质量等有关。 一种好的乳剂疫苗应是油包水（W/O）或水包油（O/W）型，粘 度低，颗粒均匀，稳定性良好，呈乳白色。
“乳剂”是将一种溶液或干粉分散成细小的微粒，混悬于另一不相溶的液体 中所成的分散体系。被分散的物质称为分散相（内相），承受分散相的液体 称连续相（外相），两相间的界面活性物质称为乳化剂。
乳化剂
1. 天然乳化剂：阿拉伯胶、海藻酸钠、蛋黄以及炼乳 2. 人工合成乳化剂 • 离子型 阴离子类乳化剂：十二烷基磺酸钠和硬脂酸铝
免疫实验动物用的佐剂配制:
(1)弗氏佐剂：矿物油75%~85％，乳化剂15％~25%，混合后经 除菌过滤而成为FIA；如向其中加入0.5mg／m1死结核杆菌即 为FCA。使用时，将含抗原的水相，与上述任一佐剂等量混合， 用力振摇即可成为均匀的乳剂。
(2) 白油佐剂：9份油和1份司本-80混合Байду номын сангаас加2％吐温-80和1％
佐剂免疫作用机理
①抗原递呈（antigen presentation） ②抗原寻的（antigen targeting）
③免疫调节（immune modulation）
①抗原递呈： 指抗原分子递呈给T细胞的方法。佐剂与疫苗联合 使用，有助于抗原性物质在胞内被加工，被MHC分子特异性的 结合、保护、运输并递呈给效应细胞。
作用特点：
① 明显增强抗原性微弱的物质诱导机体产生特异性免疫应答。
② 用最少的抗原和最少的接种次数，产生足够的免疫应答。
免疫佐剂作用方式：
① 改变正常免疫机能，吸引大量巨噬细胞以吞噬抗原； ② 改变抗原的构型，使抗原物质降解，并加强其免疫原性； ③ 延长抗原在组织内的贮存时间，使抗原缓慢降解和缓释， 并发挥免疫系统的细胞间协同作用（巨噬细胞与T细胞，T 细胞与B细胞）。
油乳剂检验
（1）粘度测定：流出法、Saybolt粘度计法。
吸管内口直径为1.2mm，室温下吸满lml乳剂，垂直放出0.4ml所 需时间作为粘度单位。
以 2-6 S为合格，不得多于10-15 S。 （2）乳剂稳定性测定： ① 加速老化法：疫苗于37℃贮存10-30d不破乳。
② 离心加速分层法：3000rpm离心15min不分层，相当于保存1 年以上不破乳。
3、缩水甘油醛（glycidaldchyde，GDA）
•大肠杆菌、噬菌体、新城疫病毒灭活效果优于甲醛。 •本品易挥发，水溶液含量为15～31mg/mL。
•0～4℃ 3个月含量渐下降，约半年失效；20℃只能保存10d。
4、-丙酰内酯（－propiolactone）又名羟基丙酸--内酯 •无色有刺激气味的液体，水溶液应密封于玻璃瓶中5℃保存 •水中溶解度37％，能与丙酮、醚和氯仿任意混合 •对皮肤、粘膜及眼有强刺激性，对动物有致癌性。 •病毒灭活后，能保持良好的免疫原性
蜂胶佐剂（ Propolis）
• 是一种优良的天然药物
• 供免疫佐剂用的蜂胶外观应具备其固有的特征
• 具有广泛的生物活性和药理作用（抗菌、抗病毒、抗肿瘤、消炎） • 具有免疫增强作用： 能保持抗原特性，增强巨噬细胞的吞噬能力，促进抗体的 产生，提高机体的特异性和非特异性免疫力。
蜂胶佐剂疫苗制备方法：
~2%硬脂酸铝，经高压灭菌后备用，注射前将配好的油佐剂与
抗原水相1：1混合，强力振摇，可配制成性状良好的乳剂疫苗。
大量生产乳剂疫苗:
• 油相: 94％白油、6％司本-80、1%~2％硬脂酸铝，灭菌即可；
• 水相：抗原液加2％~4%吐温-80
• 乳化：将油相与水相按3：1~2：1比例配制，先缓速混合，再 通过胶体磨充分乳化，可获得稳定的油包水乳剂苗。 或者将粘稠的W/O乳剂疫苗，再加2％吐温-80生理盐 水，通过搅拌或胶体磨乳化，可制成双相乳剂疫苗。
• 烷化剂（alkylating agent）
灭活机制： 1. 烷化DNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂 或双螺旋链交联，因改变DNA的结构而破坏其功能，妨碍 RNA的合成，从而抑制细胞的有丝分裂。 2. 与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢。 优点：能破坏病毒的核酸芯髓，使病毒完全丧失感染力，而 不损害其蛋白衣壳，保留其保护性抗原。 烷化剂类灭活剂： 乙酰基乙烯亚胺（AEI)、二乙烯亚胺(BEI) 、缩水甘油醛
乳剂配方与乳化方法
（1）剂在水中法：
将乳化剂直接溶于水中，在激烈搅拌下将油加入，可直接生
成O/W乳剂。若欲得W/O型，可继续加入油，直到发生变型。该
法通常用匀浆器或胶体磨，高速搅拌而得到较好的乳剂。
（2）剂在油中法： 将乳化剂溶于油相，将油相直接加入水相中得O/W，如水相 直接加入油相，得到W/O型，如欲得O/W，继续加入至变型。该 法制成的乳剂，一般均匀颗粒直径在0.5µ m左右，比较稳定。
•主要用于狂犬病灭活疫苗的制备。
影响灭活作用的因素
•
• • • • •
灭活剂特异性
微生物种类与特性 灭活剂浓度 灭活时间 酸碱度（pH） 有机物的存在
保护剂（protector）
又称稳定剂（stabilizer）：指一类能防止生物活性物质
在冷冻真空干燥时受到破坏的物质。
分类： •（根据其作用机理） ——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO）、甘油和蔗糖等 ——非渗透剂：如聚乙烯吡咯啶酮(PVP)和蛋白质等
1．保护剂种类
2．保护剂组分浓度
3．保护剂配制方法
4．保护剂酸碱度（pH）
兽医生物制品常用的保护剂：
1．5%蔗糖（乳糖）脱脂乳保护剂 3．聚乙烯吡咯烷酮乳糖保护剂 2．明胶蔗糖保护剂 4．SPGA保护剂
免疫佐剂
免疫佐剂( Immunologic Adjuvant)概念 ——当一种物质先于抗原或与抗原混合或同时注射于动物体内， 能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答，发 挥其辅佐作用的物质 ——可以增强抗原特异性免疫应答的物质。
阳离子类乳化剂：氯化苯甲烃铵、溴化十六烷三甲基
• 非离子型：月桂酸聚甘油脂、山梨醇脂和单油酸脂、 司本-80、吐温-80
白油佐剂
国内外常用白油：Drakocel-6VR、Marcol-52和Lipolul-4 7号或10号白油 质量标准: •无色无味
•50℃运动粘度7m2／s左右
•紫外吸收A250-350＜0.1％，紫外消光系数＜12×108； •单环芳烃与双环芳烃含量低于0.5％，无多环芳烃； •小鼠腹腔注射0.5ml或家免皮下注射2.0ml白油，观察60d， 表现正常。
1、乙酰基乙烯亚胺（N-acetyl ethylenimine，AEI）
•淡黄色澄明液体，有轻微氨臭味，能与水或醇任意混合。 •0～4℃可保存1年，在-20℃可保存2年
•AEI功能基团是乙烯亚胺基，可用于口蹄疫灭活苗。
•口蹄疫病毒液: 终浓度0.05％，30℃8h, 加2％硫代硫酸钠阻断
2、二乙烯亚胺（binary ethylenimine，BEI） •市购商品为0.2％的BEI溶液，在0～4℃可保存1个月; •终浓度0.02%, 加入2％硫代硫酸钠中断灭活。
（二）非颗粒性佐剂
1．肽类佐剂（peptides）：胞壁酰二肽（MDP）及其衍生物、 去胞壁酰多肽、脂肽和免疫调节多肽。
2．表面活性分子类佐剂：海藻糖合成衍生物（TDM）
3．核酸及其衍生物类佐剂：合成核苷酸聚合体、CpG 4．含硫复合物类佐剂：左旋咪唑 5．碳水化合物高分子类佐剂：香菇多糖、DEAE-葡聚糖 6．细胞因子类佐剂（cytokine）：IL-2、IL-4和γ-IFN等。
1．盐类佐剂 氢氧化铝胶、明矾、磷酸铝等。
2．油水乳剂佐剂
弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant, FCA）、弗 氏不完全佐剂（ FIA）和矿物油白油佐剂。 3．免疫刺激复合物佐剂（ISCOM） 4．蜂胶佐剂（propolis）
5．脂质体佐剂（liposomes）。
6．其他：MF59佐剂、微囊化佐剂（microencapsulation)、 硬脂酰酪氨酸佐剂和γ －菊粉等。
期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。
冻干保护剂作用机制
① 防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生 物活性物质的损伤； ② 降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保 持细胞的活力； ③ 保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复 苏和迅速修复自身。
影响保护剂效能的因素
灭活剂、保护剂与免疫佐剂
灭活剂
• 灭活 inactivation
指破坏微生物的生物学活性、繁殖能力和致病性，但尽
可能不影响其免疫原性。或指破坏诊断血清或待检血清 中的补体活性，以避免补体对诊断试验的干扰作用。 • 灭活剂 inactivator 用于灭活微生物的化学试剂或药物。