免疫佐剂:基本描述:--见到客户时可以背诵下来从而吸引感兴趣的客户与常规使用的弗氏佐剂相比,QuickAntibody免疫佐剂具有极大的优势:(1)无需乳化;(2)免疫周期短,与常规免疫相比可以节省3-5周免疫时间;(3)抗原用量少,仅为弗式佐剂的1/10;(4)不破坏抗原天然构象,易获得针对天然构象的抗体;(5)不含任何蛋白成分,佐剂本身不刺激机体产生抗体;(6)肌肉免疫;(6)无毒。
展开描述--针对客户就上述几个问题的提问,基本可以从以下几方面回答为什么无需乳化?QuickAntibody系列佐剂为水溶性佐剂,抗原与佐剂仅需用移液器吹打几下,即可混匀;弗式佐剂为油性佐剂,需要繁琐的乳化,形成油包水的稳定结构。
因此与弗式佐剂繁琐的乳化相比,QuickAntibody佐剂可节省大量时间与精力。
现在的学生事情比较多,不喜欢乳化,因此这条可以吸引他们的注意,工业客户因为免疫动物多,乳化(即使使用乳化仪)需要大量的时间,因此对这点也会有极大的兴趣。
免疫周期短?QuickAntibody佐剂有二周快速小鼠多抗制备佐剂、三周快速小鼠单多抗制备佐剂以及五周标准小鼠单多抗制备佐剂三种。
若多抗即可满足客户需求,可以建议客户制备小鼠多抗,使用我们的佐剂最快仅需2周即可制备高滴度的小鼠多抗,最慢也只需5周即可制备成功,比常规弗式佐剂8周的制备时间相比,可节省3-6周的时间,从而大大提升了客户实验效率;若客户制备单抗,可以使用我们三周佐剂或五周佐剂,与常规使用弗式佐剂免疫时间8周相比,可以节省3-5周时间,也大大提升了客户实验效率。
尤其对于实验进度要求比较着急的客户,在这一点上会产生浓烈的兴趣!另外,很多客户的动物为外包饲养,饲养成本较高,也会感兴趣!抗原用量少?QuickAntibody免疫佐剂通过减少免疫针次(常规弗式佐剂免疫需要至少4针,QuickAntibody佐剂仅需免疫2针)以及每针次抗原用量,降低抗原使用量。
每针次抗原用量真核细胞表达仅需1-10ug每针,原核细胞表达仅需10-20ug,病毒源颗粒仅需1-5ug每针。
若客户抗原为直接购买抗原、真核表达抗原(真核表达量低)、抗原表达量极低、或抗原为天然组织纯化(如从植物组织或动物组织中纯化的天然抗原),因抗原贵重或产量较低,此处会极大吸引客户。
不破坏抗原天然构象?弗式佐剂为油性佐剂,在与抗原乳化时,需要形成油包水的稳定结构,而蛋白一般亲水基团暴露在外侧,疏水基团在内侧未暴漏,形成油包水的稳定结构,必然伴随着疏水基团的外翻,从而导致抗原天然构象的改变。
QuickAntibody佐剂为水溶性佐剂,不会导致疏水基团外翻,保留抗原的天然构象,因此可以获得针对构象性表位的抗体。
若客户需要针对构象性表位的抗体,此优点会很感兴趣!对于诊断试剂公司,因为检测的蛋白基本为天然抗原,需要针对构象性表位的抗体,具有极大的吸引力。
不含有蛋白成分?QuickAntibody佐剂不含有任何蛋白成分,因而佐剂本身不会产生针对自身的抗体;弗式佐剂含有卡介苗的蛋白成分,会产生很多针对佐剂的抗体。
使用QuickAntibody佐剂制备单抗,阳性克隆率远远高于使用弗式佐剂,因此更容易获得诊断试剂需要的高质量配对抗体。
诊断试剂公司对抗体要求较高,好的单抗为百里挑一甚至更低,我们可以提供更多的阳性克隆,可以大大提高筛选获得高质量抗体的几率。
肌肉免疫?通常免疫小鼠为皮下多点免疫、足垫免疫和腹腔免疫等,本佐剂为小鼠后腿小腿肚肌肉免疫,只需一手抓住小鼠,一手免疫,一人操作,一针免疫,极大方便了免疫方法。
无毒?弗式佐剂等因含有卡介苗和矿物油等毒性物质,会造成动物机体发炎,伤口溃烂,严重可以导致动物的死亡,从而造成用户一定的损失;有客户在免疫的时候也会不小心免疫到自己的手部,从而导致手部发炎,严重的甚至需要手术切除;QuickAntibody佐剂为无毒佐剂,不会造成动物机体发炎和动物死亡。
客户实例:1、客户A--一知名诊断试剂公司:抗原为购买自俄罗斯的天然抗原,100ug/支,进货价为6000元每支,之前使用sigma公司弗式佐剂,需购买三支抗原,总金额18000元,使用我们的佐剂后,仅需购买一支抗原,节省12000元。
现已大量使用我们的佐剂,为我公司大客户之一!2、客户B--一知名抗体生产商:使用弗式佐剂免疫一只小鼠的佐剂成本为5元钱,使用QuickAntibody佐剂免疫一只小鼠的成本按照报价计算为60元;客户B,一只小鼠饲养成本为1.5元/天,使用我们的佐剂与弗式佐剂相比可节省30天时间,一只小鼠节约动物饲养成本为45元。
若代理商给予一定的折扣,QuickAntibody的佐剂成本客户完全可以接受,于此同时,我们的佐剂大大提升了客户做抗体的效率。
现在客户B为我公司佐剂大客户,今年佐剂使用量大概为200-300支。
3、客户C--一知名抗体公司:该客户对抗体要求较高,使用的抗原基本为真核表达抗原(酵母表达),要求尽可能获得针对构象性表位的抗体,我们的佐剂不破坏抗原的空间构象,因此更容易获得针对抗原构象性表位的抗体,从而使获得的抗体更容易识别天然抗原。
该客户现在正在积极试用我们的佐剂,试用成功后会大量使用该佐剂。
4、客户D--一知名诊断试剂公司:该客户因为是做诊断试剂,所以希望获得更多的阳性克隆,得到更好的配对抗体,我们的佐剂与弗式佐剂相比,阳性克隆率高,便于筛选最合适的配对抗体。
一为佐剂免疫应答强,佐剂效果好,二为不含有卡介苗,不产生无关克隆。
5、客户E--一知名生产胶体金的公司:该客户抗原均为有机小分子,如三聚氰胺、瘦肉精、黄曲霉毒素等,因为这些小分子为半抗原,需要与BSA、KLH等偶联成完全抗原。
获得优良的有机小分子抗体与获得优良的蛋白抗体相比,更加的困难。
事实证明,在使用弗式佐剂免疫时,结果有好有坏。
客户E现在在做该类抗原的抗体时,一般会分两组,一组使用弗式佐剂,一组使用QuickAntibody 佐剂,作为一个双保险,并且事实证明,由于无杂蛋白干扰,QuickAntibody佐剂更易筛选获得阳性克隆。
6、客户F--一知名抗体外包服务商:该公司结合我公司QuickAntibody佐剂,推出了快速小鼠单抗制备服务,与常规佐剂的6个月的时间相比,该公司快速小鼠单抗制备时间为2个月,并且可以提供多株细胞株;同时该客户使用我公司2周快速小鼠多抗制备佐剂,为客户提供三周快速小鼠多抗制备服务,通常兔多抗制备时间2-3个月,极大地节约了客户的时间。
7、客户G--一知名医疗生化试剂生产商:该公司主要生产羊抗,如羊抗胱抑素C等。
客户使用弗式佐剂免疫山羊,因免疫剂量较大,会造成免疫部位大面积发炎、溃烂,从而导致山羊精神状态极差,尤其是在5月-10月份,北京天气炎热,情况更加严重。
使用QuickAntibody佐剂该情况得到明显改善,因我们的佐剂不含有毒性成分(如弗式佐剂的卡介苗和矿物油等),不会造成动物机体的过多伤害,更符合动物福利的标准。
现在该客户在10-5月份使用弗式佐剂,在5-10月份使用我们公司的佐剂。
8、客户H--一知名抗体生产商:该客户动物免疫量极大,一批需同时免疫300只动物。
起初使用弗式佐剂,虽然购买了6台昂贵的乳化仪(一台金额要1w以上),一个离心管样品的乳化30s,但是大量的样品乳化,也需要1个上午的时间。
而QuickAntibody佐剂,仅需抗原与佐剂在离心管中混匀即可,无需乳化,客户可以现混现用,为他们提供了极大的方便。
使用中已经出现的问题:1、有客户没有仔细阅读说明书,使用QuickAntibody佐剂时按照弗式佐剂方法与抗原进行乳化等操作,并在4度冰箱放置过夜,第二日取出直接免疫,结果造成效价不理想。
答复:QuickAntibody佐剂无需乳化,而且无论是佐剂本身还是与抗原混合后,长时间静置均易产生沉淀,因此均需要摇匀后才能配制和注射。
2、有客户没有仔细阅读说明书,使用QuickAntibody佐剂之前发现佐剂里面有沉淀成分,以为是污染物,离心去除,导致实验结果效价不理想。
答复:QuickAntibody佐剂产生沉淀为正常现象,只需在用前摇匀即可,若离心去除,必然影响免疫效果。
3、有客户使用QuickAntibody佐剂免疫小鼠后腿小腿肚肌肉时,误把踝关节当成膝关节,从而使免疫部位太过偏下,免疫100ul的佐剂与抗原混合液时,大量液体流出。
答复:小鼠后腿大腿一般被腹部皮肤包裹,我们正常见到的后腿肌肉部分为小腿肌肉。
另外若免疫至踝关节,由于免疫部位距离发生有效免疫应答部位较远,抗原在扩散至淋巴结前容易被降解,导致免疫应答效率降低。
4、有客户使用QuickAntibody佐剂免疫小鼠,因动物较多,免疫时间较长,最后佐剂在针管中沉淀在管壁,导致前面免疫的小鼠抗体效价较高,后面免疫的小鼠抗体效价较低。
答复:QuickAntibody佐剂易产生沉淀,建议在熟练使用之前,每次抽取较少量佐剂与抗原混合物进行免疫(以二、三只小鼠用量为佳);在操作熟练后,可以适当增加免疫动物的数量(如每抽取一次免疫五只以上小鼠)。
5、有客户使用QuickAntibody佐剂制备单抗,抗原为多肽偶联载体蛋白,免疫两针后针对多肽的ELISA滴度仅为1:200,但是成功融合出4株杂交瘤细胞株,其中两株产生的单抗可以做免疫组化,完全达到他们的预期结果!答复:我们说明书中所说的效价为蛋白抗原免疫后的效价,对于多肽和小分子来说,免疫后不可能达到如此高的滴度!原因是多肽和小分子为半抗原,本身只有一个表位或不足一个表位,而蛋白抗原有成百上千个表位。
建议客户检测针对载体蛋白的ELISA滴度,如果达到说明书滴度范围,而且检测到一定水平的多肽或小分子滴度,则表明免疫成功,完全可以继续后续的融合工作。
此时多肽或小分子滴度高低取决于该表位的免疫原性和偶联效率,基本与佐剂无关!然而,与蛋白抗原相比,多肽或小分子单抗的阳性克隆率则要低得多,因此客户需要筛选更多的克隆。