5.6从开始放入培养箱算起，经过五昼夜后，弃去封口水，测定剩余的溶解氧。
5.7水中溶解氧的测定:依据碘量法溶解氧检测指导书
5.8验证试验
为了检验接种稀释水、接种水和分析人员的技术，需进行验证试验。将20ml葡萄糖—谷氨酸标准溶液（3.8）用接种稀释水(5.2)稀释至1000ml,并按5.5、5.6、5.7的步骤进行测定。得到的BOD5应在180-230mg/L之间，否则应检查接种水，如果必要还应检查分析人员的技术。
3.4氯化铁溶液:将0.25g六水合氯化铁溶于水,稀释至1000 ml。
3.5盐酸溶液(0.5mol/L):将40 ml(=1.18g/ml)盐酸溶于水,稀释至1000ml。
3.6氢氧化钠溶液(0.5mol/L):将20 g氢氧化钠溶于水,稀释至1000ml。
3.7亚硫酸钠溶液(1/2Na2SO3=0.025 mol/L):将1.575g亚硫酸钠溶于水,稀释至1000 ml。此溶液不稳定,需每天配制。
1.分析项目
测定水样的五日生化需氧量（BOD5）。
2.所需实验仪器
2.1恒温培养箱
2.2溶解氧瓶（250ml）
2.3 5—10L容器
2.4 1000ml量筒
2.5酸式滴定管
2.6玻璃搅棒：棒的长度应比所用量筒高度长200mm。在棒的底端固定一个直径比量筒底小、并带有几个小孔的硬橡胶板。
2.7虹吸管
2.8其他常用实验室仪器
5.4用少量稀释水把两个培养瓶洗涤一两次，再用虹吸管把稀释水注满两个培养瓶并溢出少许，加塞。此为空白。瓶内不应留有气泡，其中一个培养瓶立即测定溶解氧。另一个培养瓶的瓶口进行水封后，放入20±1C的恒温培养中。
5.5取一干净的1000ml量筒，根据水样的CODcr范围，从附表中找出合适的f2值。对水样进行稀释。要求添加水样或稀释水时均用虹吸的方法，不能产生气泡。根据不同的稀释比配制800ml水样。
一般五日内消耗的溶解氧占原来溶解氧的40%—70%为最好。
7.5各取样点的f2值：
初沉池：0.010，0.008，.006
二沉池：0.5，0.3，0.2
放流井：1，0.9，0.8
5.分析程序
5.1稀释水的制备在5—10L容器内装入一定量的水，控制水温在20C左右。然后用气泵曝气4—6小时，使稀释水中的溶解氧接近饱和。容器口盖以两层经洗涤晾干的纱布，置于20C左右室温中放置数小时，使水中溶解氧含量达8mg/L左右。临用前每升水中加入氯化钙溶液、氯化铁溶液、硫酸镁溶液、磷酸缓冲液各1ml，并混合均匀。稀释水的pH值为7.2。
5.2接种稀释水的制备新鲜的A/0池混合液稍沉淀片刻，取上层液加入刚制备的稀释水中，每升稀释水中约加入2ml上层液。临用前配制。接种稀释水的BOD5应在0.3－1.0 mg/L为宜。
5.3水样的预处理
5.3.1水样的pH值若超出6.57.5范围,可用盐酸或氢氧化钠稀溶液调节，但用量不要超过水量体积的0.5%。若水样的酸度或碱度很高，可改用高浓度的碱或酸液进行中和。
3.8葡萄糖—谷氨酸标准溶液：
各称取150±1mg预先在103℃下干燥1h的无水葡萄糖(C6H12O6)和谷氨酸(HOOC-CH2-CH2-CHNH2-COOH)，溶于蒸馏水中，稀释至1000ml,并混合均匀。(此溶液临用前配制)。
4.采样及样品保存
于指定地点,用玻璃或聚乙烯采样瓶采集适量水样,带回实验室在2小时内进行分析,否则应在04C下保存,并在6小时内进行分析,如果不能在6小时内分析,则应将贮存时间和温度与分析时间一起报告,决不能超过24小时才分析。
3.所需试剂
3.1磷酸盐缓冲液：将8.5g磷酸二氢钾、21.75g磷酸氢二钾、33.4g七水合磷酸氢二钠和1.7g氯化铵溶于水中,稀释至1000ml。此溶液的pH值应为7.2。
3.2硫酸镁溶液：将22.5g七水合硫酸镁溶于水中,稀释至1000 ml。
3.3氯化钙溶液:将27.5g无水氯化钙溶于水,稀释至1000ml。
6.五日生化需氧量的计算
（D1—D2）—（B1—B2）f1
BOD5 =
f2
式中：D1—接种稀释水样在培养前的溶解氧。
D2—接种稀释水样在培养后的溶解氧。
B1—接种稀释水在培养前的溶解氧。
B2—接种稀释水在培养后的溶解氧。
f1—接种稀释水在培养液中所占的比例。
f2—水样在培养液中所占的比例。
7.注意事项
5.3.2当采集的水样温度偏低时，应迅速使水样升温至20C左右，在不使满瓶的情况下充分振摇时时开塞放气，以赶出过饱和的溶解氧。当采集的水样温度偏高时，应迅速使水样温度冷却至20C左右，并充分振摇，使与空气中氧分压接近平衡。
5.3.3若样品中含游离氯或结合氯，应加入所需体积的亚硫酸钠溶液（3.7），使游离氯和结合氯失效，注意避免加过量。
7.1玻璃器皿应彻底洗净。先用洗涤剂浸泡清洗，然后用稀盐酸浸泡，最后依次用自来水、蒸馏水洗净。
7.2在用虹吸管、吸量管等移取水样、药品或加稀释水时，管口均要浸入液面下，以免操作过程中产生气泡，影响测定的准确性。
7.3接种稀释水BOD5应在0.31.0mg/L之间,配制后应立即使用。
7.4接种稀释水样的五日耗氧应大于2 mg/L,五日培养后的残留溶解氧应大于1 mg/L。