原代培养
1．胰酶消化法（以小鼠肝脏细胞培养为例）
①器材：将孕鼠或新生小鼠引颈处死，置75%酒精泡2—3秒钟（时间不能过长、以免酒精从口和肛门浸入体内）再用碘酒消毒腹部，取胎鼠带入超净台内（或将新生小鼠在超净台内）解剖取肝脏，置平皿中。

②用Hank’s液洗涤三次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。

③用手术剪将肝脏剪成小块（1mm2），再用Hank’s液洗三次，转移至离心管中。

④视组织块量加入5—10倍的0.25%胰酶液，37℃水浴中消化20—40分钟，每隔5分钟振荡一次，使细胞分离。

⑤待组织变得疏松，颜色略为发白时，加入3—5ml培养液（含10%小牛血清）以终止胰蛋白酶消化作用（或加入胰酶抑制剂）。

⑥1000rpm，离心10分钟，弃上清液。

⑦加入Hank’s液5ml，冲散细胞，再离心一次，弃上清液。

⑧加入培养液l—2 ml（视细胞量），血球计数板计数。

⑨将细胞调整到5×105/ml左右，转移至25ml细胞培养瓶中，37℃下培养。

上述消化分离的方法是最基本的方法，在该方法的基础上，可进一步分离不同细胞。

细胞分离的方法各实验室不同，所采用的消化酶也不相同（如胶原酶，透明质酶等）。

2．组织块直接培养法
自上述方法第3步后，将组织块转移到培养瓶，贴附于瓶底面。

翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块，置37℃培养箱静置3—5小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。