实训1 海带中海藻酸钠的提取1.实训目的1.1巩固常用基本仪器的操作1.2巩固几种常用溶液的配制1.3巩固EDTA标准溶液的配制与标定方法1.4掌握EDTA测定溶液中钙离子的测定1.5掌握茚三酮溶液与蛋白质颜色反应的原理和方法1.6掌握从虾壳中提取甲壳素的原理和方法2.实训原理甲壳素的提取方法主要有酸碱法、EDTA脱钙法和酸碱交替法等，其中酸碱交替法具有可提高反应温度、反应时间短，无需脱色处理等优点而为本文采用。

原理：盐酸处理溶去其中的碳酸钙；碱煮处理去除与甲壳素共价交联的蛋白质；虾壳中含有的虾红素在碱煮过后，仍有大部分存在，故甲壳素显现红色，须用氧化还原的方法来处理虾红素。

3.实训原料、仪器、药品3.1实训材料虾壳、蟹壳3.2实训仪器序号名称规格数量备注1 烧杯100、250 、500 mL 10、5、5个按顺序2 锥形瓶250mL 6个3 移液管5、10、25、50mL 各一支4 容量瓶100、250mL 各3个5 酸性滴定管25mL 一支6 数显恒温水浴箱一台7 电子天平8 电热恒温烘干箱9 玻璃棒数支10 滤纸若干11 量筒10、50、100mL 各一支3.3实训药品序号名称规格数量备注1 浓盐酸（体积百分数为35~38%）2 NaOH3 30％过氧化氢4 高锰酸钾5 亚硫酸氢钠6 酸性络蓝K K—B指示剂的7 萘酚绿B配制8 EDTA EDTA的配制与9 ZnO滴定10 氨水（1:1）11 1%的铬黑T（EBT）12 茚三酮配制1%茚三酮13 氯化亚锡溶液4实训内容4.1实训试剂的准备与配制4.1.1 盐酸溶液的配制试剂:浓盐酸（体积百分数为35～38%）5％盐酸：先量取100mL蒸馏水于烧杯中，再量取浓盐酸67.6mL倒入烧杯中，用蒸馏水稀释至500mL，充分摇匀。

倒入带玻璃塞的玻璃瓶，并贴上标签。

4.1.2 氢氧化钠溶液的配制药品：氢氧化钠5％氢氧化钠：在台称上用小烧杯迅速称取称取固体NaOH27.5 g，用水溶解在烧杯中，用水稀释至500mL，存于盖橡皮塞的试剂瓶中。

4.1.3 EDTA标准溶液的配制与标定试剂：EDTA、ZnO（M ZnO=81.37）、NH3一NH4Cl缓冲液（PH=10）、氨水（1:1）、1%的铬黑T（EBT）、6mol/L盐酸步骤：1、配制0.02mol/L EDTA 1000mL在台称上称取EDTA二钠盐7.0～7.6g溶入150～200mL温水（蒸馏水）中，稀释至1000mL，装入试剂瓶中，待标定。

2、配制ZnO标准溶液250mL在分析天平上准确称取ZnO0.3～0.4g于小烧杯中。

滴加6mol/L盐酸至全部溶解（约5～10mL），定量转移至容量瓶中，用蒸馏水稀释定容至250mL。

3、准确各取三份25.00mLZnO溶液+25mL蒸馏水入三角瓶中。

慢慢滴加氨水，至刚好出现浑浊，加入10mL缓冲液，滴加3～4滴铬黑T。

4、用0.02mol/L EDTA滴定，由酒红色→蓝色为终点。

数据记录及处理（见表1）：公式：C EDTA =(m ZnO /M ZnO *25/250)/(V EDTA /1000)表1 EDTA溶液的标定样品号 1 2 3ZnO的质量（g）V EDTA (mL)C EDTA (mol/L)C EDTA平均值(mol/L)4.1.4 铬黑T指示剂的配制4.1.5 1％高锰酸钾、1％亚硫酸氢钠的配制药品：高锰酸钾、亚硫酸氢钠步骤：1、称取3g高锰酸钾固体溶于适量水中稀释至300mL，煮沸半小时、盖上表面皿放置黑暗处2天，取上清液备用。

2、称取3g亚硫酸氢钠固体溶于适量水中稀释至300mL。

4.1.6 1%茚三酮溶液的配制药品：茚三酮、氯化亚锡步骤：取1g茚三酮溶于35mL热水，加氯化亚锡0.04g（防腐），过滤后于暗处放置24h，定容至100mL。

4.2脱钙实验分别称取三份破碎成1cm的虾壳各15g于两个烧杯中，加入100mL5％HC1溶液，常温下浸泡8 h，并不时搅拌。

室温下过滤，滤液转移到250mL容量瓶中定容，从容量瓶中移取一定体积经处理后的样液于250mL的锥形瓶中，加入50mLH2O，NH3一NH4Cl缓冲液5mL，再加4滴络黑T指示剂，摇匀，用0.02mol·L-1EDTA标准溶液滴定。

当溶液由紫红色变为蓝色即为终点。

表4 虾壳脱钙效果烧杯 1 2 3酸浸时间（h）8 8 8虾壳质量（g）C EDTA（mol·L-1）V消耗EDTA （mL）脱钙率（%）平均脱钙率（%）脱钙率按下式计算：式中：η——脱钙率，％；式中：η——脱钙率，％；V ——溶液体积，mL；V EDTA ——滴定消耗的体积，L；C EDTA ——ED T A浓度，mol·L-1；M Ca ——钙的摩尔质量，g·mol-1；m ——虾壳的质量，g；4.3脱蛋白质实验在经脱钙处理后的样品的烧杯中加入100mL浓度5％NaOH溶液，在70℃的水浴中处理3h，进行脱蛋白。

处理完毕后用清水洗至中性，然后再加入50mL 5％浓度的氢氧化钠反应30min，取部分溶液调pH至中性后取1mL，加入0.5mL1%茚三酮溶液在沸水中加热2min，看是否有颜色变化。

若溶液变蓝，说明脱蛋白未完全；若溶液无色，说明已脱蛋白完全。

4.4脱色实验用1％KMn04溶液浸泡1.5h，再用1％NaHSO3溶液浸泡1.5h。

水洗后，烘干（105℃）可得甲壳素。

表9 虾（蟹）壳中甲壳素的产率虾壳重量（g）甲壳素重量（g）甲壳素含量（%）甲壳素含量平均值（%）5实训结果与分析实训2 天然植物中纤维素含量的测定（滴定法）1.实验目的通过本实验可以测定各类天然植物中木质素、纤维素的含量。

2.实验原理纤维素是构成细胞壁的基础物质。

纤维素由β— D一葡萄糖基通过1，4一糖苷键联结而成的高分子化合物。

纤维素分子中大约含有几千个葡萄糖单元，它的分子量约为几十万。

植物中天然纤维被半纤维和木质素所包裹，纤维素能否完全暴露出来，关键是样品预处理技术，如用浓硫酸、硝酸、硝酸一乙醇、盐酸一中性溶剂等对样品进行预处理可以破坏包裹物质，有利于纤维素的测定。

由于测定方法和条件的不同，半纤维素、木质素被破坏的程度不同，得到的纤维素含量也存在一定差异性。

通过分析对比，选用72％硫酸水解测定天然植物中的纤维素。

反应原理：纤维素在硫酸介质中用重铬酸钾氧化为二氧化碳和水，反应方程式如下：过量的重铬酸钾用硫代硫酸钠返滴，淀粉碘化钾溶液为指示剂。

过量的重铬酸钾用硫代硫酸钠返滴，淀粉碘化钾溶液为指示剂。

木质素是由4种醇单体(对香豆醇、松柏醇、5一羟基松柏醇、芥子醇)形成的一种复杂酚类聚合物，它是包围于管胞、导管及木纤维等纤维束细胞及厚壁细胞外并使这些细胞具有特定显色反应(加间苯三酚溶液一滴，待片刻，再加盐酸一滴，即显红色)的物质。

根据木质素的性质，测定木质素的方法有直接浓酸水解分离测定法、光度法、红外光谱法、氧化还原反应滴定法等，对天然植物的木质素采用氧化还原滴定法进行含量测定。

反应原理：木质素在醋酸的作用下，易溶于乙醇和乙醚的混合液，在硫酸介质中用重铬酸钾氧化为二氧化碳和水，反应方程式如下：过量的重铬酸钾用硫代硫酸钠回滴，淀粉KI溶液为指示剂。

其中加氯化钡溶液的作用是让溶出的木质素和硫酸钡一起沉淀。

3.实验材料及试剂3.1原材料(每组约0.6g)天然植物原料（香蕉茎、甘蔗渣、花生壳、竹子、稻杆、玉米衣、葵叶、椰棕、剑麻、藕茎等）烘干后，打成粉末。

3.2化学试剂碘化钾溶液（20%）重铬酸钾（0.100mol/L）淀粉溶液（0.5%）的标准溶液（0.2mol/L）用重铬酸钾标准溶液标定硫酸（72%）硫酸（10%）醋酸（2%）硝酸（2%）、无水乙醇(AR)、硝酸(AR)、硫酸(AR)、乙醚(AR)、氯化钡(AR)3.2.1 250mL 20%的碘化钾溶液的配制（每组60mL）药品：固体碘化钾粉末仪器：电子分析天平、玻璃棒、烧杯（500ml）、称量纸、棕色试剂瓶（250ml）、量筒（100ml）、胶头滴管计算：m（KI）=20%*250=50g步骤：称取50g固体碘化钾粉末，然后放入500ml烧杯中，加入200ml的蒸馏水溶解，并不断搅拌至完全溶解，最后储存到棕色的试剂瓶里，贴标签。

3.2.2 250mL 0.100mol/L的1/6重铬酸钾溶液的配制(每组50mL)（0.025mol/L的1/6重铬酸钾溶液由此溶液稀释）药品：固体重铬酸钾粉末仪器：电子分析天平、玻璃棒、小烧杯（100ml）、称量纸、容量瓶（250mL）、胶头滴管、试剂瓶（250mL）计算：m（K2Cr27）=C*V*M=0.100*0.25*294.18/6=1.2258g步骤：称取1.2258g固体重铬酸钾，然后放入小烧杯，加入适量的蒸馏水溶解，并不断搅拌至完全溶解，再转移到250mL的容量瓶里，继续加蒸馏水稀释至刻度，摇匀，储存到试剂瓶里，贴标签。

3.2.3 100mL 0.5%淀粉溶液的配制(每组8mL)药品：可溶性淀粉仪器：电子分析天平、玻璃棒、烧杯（250ml）、小烧杯（100ml）、称量纸、试剂瓶（100ml）、表面皿、量筒（100ml）、电炉计算：m（淀粉）=0.5%*100=0.5g步骤：称取0.5g可溶性淀粉放入小烧杯中，量取99.5ml蒸馏水，倒少量于盛放淀粉的烧杯里，调成糊状，将其余蒸馏水烧开倒进去，一起煮开后加盖冷却就行了，冷却后转移至100mL试剂瓶中，贴好标签。

3.2.4 250mL 10%硫酸溶液的配制(每组80 mL)药品：98%硫酸溶液仪器：玻璃棒、刻度吸管（10ml）、烧杯（500ml）、试剂瓶（500ml）、量筒（100ml）计算：根据C1*V1=C2V2，即98%*V1=10%*250ml，V1=25.5ml步骤：量取25.5ml 98%硫酸溶液，注入盛有224.5ml蒸馏水烧杯中，注入时不断的用玻璃棒搅拌，冷却后储存到试剂瓶里，贴标签。

3.2.5 100mL 2%醋酸溶液的配制（每组40mL）药品：醋酸（36%）仪器：容量瓶（100mL）、试剂瓶（100ml）、刻度吸管（5ml）、胶头滴管、小烧杯（100ml）计算：根据C1*V1=C2V2，即36%*V1=2%*100ml，V1=5.56ml步骤：量取5.56ml36%醋酸溶液，注入100ml的容量瓶中，加蒸馏水到刻度线，然后摇匀，储存到试剂瓶里，贴标签。

3.2.6 100mL 2%硝酸溶液的配制(每组10mL)药品：浓硝酸(70%)仪器：刻度吸管（5ml）、烧杯（250ml）、量筒（50ml）、试剂瓶（100ml）、玻璃棒、计算：根据C1*V1=C2V2，即70%*V1=2%*100ml，V1=2.86ml步骤：量取2.86ml浓硝酸溶液，注入盛有97.14ml蒸馏水烧杯中，注入时不断的用玻璃棒搅拌，冷却后储存到试剂瓶里，贴标签。