分光光度法测定总黄酮含量：操作流程图2017.10
【文献依据】Xican Li, Dongfeng Chen, Ying Mai, Bi Wen, Xiaozhen Wang. Concordance between antioxidant activities in vitro and chemical components of Radix Astragali. Natural Product Research.
2012;26:1050-1053.
【简介】黄酮包括黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、双黄酮等，他们大多同时存在于某一种中药及其他植物中。

为了测定这些黄酮的总含量，便建立了总黄酮的检测方法。

其原理是：黄酮中的处于相邻羰基、羟基可以共同络合金属而显色。

根据显色之深浅（即吸光度A值之大小），判断的总黄酮含量之高低。

常用的显色剂是亚硝酸钠-硝酸铝，检测波长是508nm。

采用分光光度计，并以某种标准品绘制工作曲线，依该曲线所建立的回归方程，计算其含量。

【检测方法与实验流程图】
图1实验流程图
【溶液配制】
1.5%亚硝酸钠溶液配制：称取0.5g亚硝酸钠（NaNO2）固体，加蒸馏水至10mL，即得。

2. 10%硝酸铝溶液配制：称取1g硝酸铝固体，加蒸馏水至9mL，即得。

3. 4% 氢氧化钠溶液配制：称取2g氢氧化钠固体，加蒸馏水至48mL，即得。

4. 芦丁标准液配制：精密称取芦丁10.4 mg置25mL容量瓶中，加80%乙醇溶液溶解、定容。

5. 样品液配制：视样品的溶解性，可选用甲醇、乙醇、95乙醇、水作溶液。

浓度尽量高，但要有精确的数值。

【标准曲线绘制】（芦丁）
精密量取0.0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 mL芦丁标准液，代替上图中的“样品液0.5mL”，依“实验流程
图”，测A508nm值：
绘制标准曲线如下：
m
n
8
5
A
Concentration (mg/ml)
总黄酮测定的标准曲线（芦丁）y = -0.00339 + 11.92871 x r=0.99926。