AOAC 967.25－967.28
处理样品 35℃ 24±2h
1mL+10mLSC
1mL+10mLTT
35℃ 24±2h XLD & HE & BS 35℃ TSI 35℃ 纯培养物 尿素酶＋ 非沙门菌 尿素酶－ 24±2h（BS 24h&48h） & LIA 24±2h 不纯培养物 MAC or XLD or HE 纯培养物 非 沙 门 菌 非 沙 门 菌
2．参照国际分析协会（AOAC）、国际标准组织（ISO）及美
国食品药品管理局（FDA）的有关标准；
3．结合标准的比对实验和验证实验，积极吸取新方法、新技 术，修订标准。
1. GB/T4789.4 2. AOAC Official Method ：967.26，967.27，967.28 3. ISO ：6579
3 修改了样品处理方式
增加拍击式均质器，均质袋可直接培养。
4 增加调整pH值
1 使用“TTB、SC”，取消“MM”
原国标：“MM或TTB、SC AOAC：TT、SC FDA：RV、TT ISO：RV、SC
选择性增菌的目的是最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使 用两种选择性分离增菌液，一种是抑制除沙门氏菌以外其肠道 菌的生长，一种是在不影响其他肠道菌生长的情况下促进沙门 氏菌的生长。
65.3
I-SS-M
C-SS I-HE C-HE I-XLD C-XLD I-BS C-BS CHRO C-DHL C-WS
81.0
52.0 83.2 80.0 83.0 86.2 106.6 77.7 68.4 98.4 71.6
I： 进口 C：国产
ห้องสมุดไป่ตู้
TSA（对照）
100.0
C-BS
I-BS
C-HE
非沙门氏菌
报告
1 取消样品分类，前增菌液统一为“缓冲蛋白胨水”
原国标：BPW
FDA、AOAC：多种前增菌液
ISO：BPW
2 对所有样品均进行8-18h前增菌 原国标只对冻肉、乳品、蛋品等加工食品进行前增 菌，FDA、AOAC、ISO、Canada MFHPB、CCFRA 等组织或国家对所有样品都进行前增菌。
挑取可疑菌落
TSI，赖氨酸，NA， 靛基质， 尿素 (pH 7.2)， KCN H2S+靛基质- 尿素KCN- 赖氨酸+ H2S+ 靛基质 + 尿 素- KCN-赖氨酸+ H2S-靛基质-尿素 -KCN- 赖氨酸+/-
商品化生化 鉴定系统
反应结果与左 侧描述不符
甘露醇+、山梨醇+
ONPG-
沙门氏菌，血清学试验
由于食品生产及流通的全球化、新的食品加工 技术的应用、东西方饮食习惯的交融、自然环 境的改变等因素的影响，目前沙门氏菌污染的
食物种类、季节及场所发生了重大变化。同时，
随着检测技术的发展，对于沙门菌的快速检测
方法层出不穷，有些方法已通过国际权威机构
认证（如AOAC）成为了国际标准方法。
1. 修订任务由卫生部全国食品卫生标准委员会下达， 由微生物标准协作组具体实施。
H抗原，LIA，酚红卫矛醇肉汤，色氨酸肉汤 （KCN，丙二酸盐，吲哚），O抗原 补充生化试验
沙门菌
酚红乳糖肉汤，酚红蔗糖肉汤，MR－VP,西蒙氏柠檬酸盐
ISO 6579:1993(E)
微生物－沙门菌检测的通用方法
25g样品 225mL BPW 35℃ or 37℃ 16~20 h 0.1mL+10mL RV 42℃ 24h 酚红煌绿琼脂 （亮绿琼脂） & 10mL+100mL SC 35℃ or 37℃ 24h,48h 第二种选择性平板
食品卫生微生物学检验（GB/T4789.4）
全国食品卫生标准委员会 微生物标准协作组
2008年11月14日-18日

修订背景 国内外方法 修订内容
前增菌




选择性增菌 分离平板 生化鉴定 血清学鉴定 报告
回顾一下食品卫生微生物学检验标准的制定， 经历了从无到有，从事该领域的工作者，花费了巨 大的心血，先后制修订了84版、94版、和2003版 的检验标准，每版的标准，都为该年代的食品卫生 工作提供了巨大的技术支持，同时也深深地烙上了 该时代的经济特征。
检样匀液25mL ＋MM （或TTB）100mL 42 ℃ 18h～24h
检样匀液25mL ＋SC100mL 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h
BS 36 ℃ ± 1 ℃ 40h～48h
DHL（或HE、WS、SS） 36 ℃ ± 1 ℃ 18h～24h
TSI（排除A/A H2S－结果 ），靛基质，尿素，KCN，赖氨酸
4 . USFDA ： Bacteriological Analytical Manual,
Chapter 5: Salmonella。
1 前增菌； 2选择性增菌；
3 分离；
4 生化鉴定；
5. 血清学鉴定；
6.报告。
国家标准
USFDA
FSIS AOAC
ISO
中华人民共和国国家标准
GB/T 4789.4-2003
检样 25g（mL）样品+225 mLBPW 36 ℃±1 ℃，8 h～18h 1 mL+TTB 10 mL 42 ℃±1 ℃，18 h～24 h BS 36 ℃±1 ℃，40 h～48 h 1 mL+SC10 mL
沙门氏菌检验程序
36 ℃±1 ℃，18 h～24 h XLD（或HE、科玛嘉显色培养基） 36 ℃±1 ℃，18 h～24 h
2） 生化鉴定项目进行调整（续）
为保持与原标准的一致性，本标准也保留了可 以同时直接接种蛋白胨水 (供做靛基质试验)、尿 素琼脂 (pH7.2)、KCN 培养基的内容。本部分还 增加了对疑似菌落进行留样确认的部分，以备必 要时复查，这对生化鉴定不确定的菌落进行进一 步验证是非常必要的。
第1位数
O N P G 1 0 A L D D H C 2 4
35± 1℃ 18~24h & 48h TSI & LIA 血清学试验
商业生化试剂盒或自动鉴定系统 or 传统生化鉴定
报告结果
AOAC Official Method 967.25 Salmonella in Foods Preparation of Culture Media and Reagents AOAC Official Method 967.26 Salmonella in Processed Foods Detection AOAC Official Method 967.27 Salmonella in Foods Identification AOAC Official Method 967.28 Salmonella in Foods Serological Tests
H2S＋ 靛＋ 尿－ KCN－ 赖＋ 甘露醇 沙门氏菌血清学试验 山梨醇
H2S－ 靛－ 尿－ KCN－ 赖＋/－ ONPG － 沙门氏菌
非如左述的各种反应结果
沙门氏菌血清学试验
非沙门氏菌
细菌学分析手册（FDA/BAM）
样品（20类）25g
225mL 乳糖肉汤（LB）or 胰酪胨大豆肉汤（ TSB）or 煌绿溶液 （BG）or 通用前增菌肉汤（UPB）or营养肉汤（NB）or 再造脱脂奶粉 or 四硫酸盐煌绿（TT） pH6.8±0.2 24±2 h 35℃ TT 43±0.2℃ or 35±2.0℃ 24±2h RV 24±2h 42±0.2℃
ISO进行O抗原、H抗原鉴定。
综合以上生化试验和血清学鉴定的结果,报 告25g样品中检出或未检出沙门氏菌。
选择性增菌液的配置 分离培养基的质控 疑似菌落的挑选
API 20E 结果判读
血清质量

VIDAS（生物梅里埃公司） BAX （杜邦公司）


VIDAS 应用酶联免疫技术制造的全自动免疫分析仪 ， 用荧光分析技术通过固相吸附器，用已知抗体来 捕捉目标生物体，然后以带荧光的酶联抗体再次 结合，经充分冲洗，通过激发光源检测，即能自 动读出发光的阳性标本，其优点是检测灵敏度高， 速度快，可以在48小时的时间内快速鉴定沙门氏 菌、大肠杆菌O157：H7、单核李斯特菌，空肠 弯曲杆菌和葡萄球菌肠毒素等。
使用BS、XLD、HE、科玛嘉显色培养基
原国标：BS、DHL（或HE、WS、SS） FDA：BS、XLD、HE AOAC：BS、XLD、HE ISO：phenol red brilliant green琼脂、BS或HE
为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必须使 用两种以上选择性分离培养基。
I-SS
第2位数
O D C 1 + 1 C I T 2 4 + + 2 4 H 2 S
第3位数
U R E 1 0 T D A 2 0 4 0 I N D
第4位数
V P G E L 2 0 G L U 4 + 4
第5位数
M A N 1 + 1 I N O 2 S O R 4
第6位数
R G A 1 + 1 S A C 2 0 M E L 4 + 4
I-HE
I-XLD
C-XLD（变形菌落-错误）
1） 采纳API 20E或Vitek GNI为传统生化鉴 定方法的选择性替代方法”。
2） 生化鉴定项目进行调整 原国标中生化鉴定是将可疑菌落同时接种于三糖铁
（TSI）琼脂、蛋白胨水 (供做靛基质试验)、尿素琼脂 (pH7.2)、氰 化钾 (KCN) 培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基； 现修改为：在接种TSI琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的同时增 加一项营养琼脂（NA），经TSI琼脂和赖氨酸脱羧酶试验培养基的 选择后，可筛掉大部分非沙门氏菌株，大大减少了工作量，同时也 满足了API 20E或Vitek GNI鉴定的需要。