物理除菌、过滤、离心、沉淀等
化学方法： 消毒剂、抗菌素灭菌
2、灭菌
（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在9.8×104—10.8×104Pa 温度在121℃ 灭菌20—30min
（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌
（3）塑料器皿灭菌： 多采用高压蒸汽消毒灭菌
（4）金属用具灭菌：灼烧灭菌 浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使
如果没有超净台，可选择比较容易做的材料，就 用胡萝卜，在外面的开放的环境下，点上两个酒精灯， 最主要保证在火焰温度的范围内，温度可以保证无菌， 瓶子也置于酒精灯的外焰灼烧灭菌，而胡萝卜也进行 外部的消毒，用消毒的刀片割里面的韧皮部即可。
12、细胞分裂素类
13、赤霉素类和脱落酸
因地制宜，创设实验
上述是正规的组培条件，很多学校并不具备这样 的条件。但因为组培实验在课标中是应用要求，最好 创设条件做一下。
比如做一个组培的实验最低要求就是要有一个灭 菌锅和一个超净台，这个就能满足洁净的要求。
如果没有灭菌锅可用高压锅代替，进行细菌的灭 菌；
氧气是愈伤组织生长所必需的
培养基的渗透压
调节渗透压常常从糖入手
pH值
植物组织培养时培养基的pH值大多在5.0—6.5
植物组织培养的营养条件
1.大量营养元素： 2.微量营养元素：
3、碳源
4、维生素类
5、肌醇
6、氨基酸
7、天然复合物 如：水解酪蛋白、玉米胚乳、酵母提取物
8、琼脂
9、活性炭 10、抗生素 11、生长素类
11、接种结束后，清理和关闭超净工作台。
注意：操作期间应经常用70%—75%的酒精擦 拭工作台和双手；接种器械应反复在95%的 酒精中浸泡和在火焰上消毒。
第二节 植物组织培养所需的环境 条件
温度
植物材料一般最适温度在25±2℃之间
光照
最常用的光周期是光照16h，黑暗8h
湿度
环
境
条
件
气体
一般情况下，培养器内相对湿度应达100%， 培养室内环境的相对湿度在70%—80%
植物组培实验室设置条件及器具
一、实验室组成 二、基本设备 三、培养器皿及实验用具 四、无菌条件及创设 五、无菌操作 六、组培的环境条件和营 养条件
一、实验室组成
组织培养实验室布局的总体要求
便于隔离 便于操作 便于灭菌 便于观察
实验室 组成
基本实验室
准备室 缓冲室 无菌操作室 培养室
细胞生物学实验室 辅助实验室 温 室
蒸馏水冲洗 4—5次
备用Leabharlann 六、无菌操作实验员消毒 实验室、无
菌台灭菌
实验台 卫生
实验器材 的灭菌
消毒
无菌接种
培养室 培养
1、消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接 种室。
2、打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯， 照射40min左右，后关闭。
3、开启过滤室风机，使无菌风吹拂工作台面 和四周的台壁。
4、用70%—75%的酒精擦拭工作台和双手。
生化分析实验室
基本实验室布局平面图
搁 水槽 架
搁
实
4.0m 架
验
台
电
炉
准备室
门
4.5m
冰箱 无菌台
药 品 及 无菌台 仪
器 无菌室
柜
缓冲室
搁
拉 窗
培养架
培养架
架 培养室
培
培
养
养
架
架
3.0m
3.5m
组织培养准备实验室
缓冲室
培养室
无菌室（一）
无菌室（二）
二、仪器与设备
1、基本设备 冰箱、电炉、酸度计、纯水器、
用
（5）接种室灭菌
接种室
紫外灯 照射
超净工 作台
紫外灯 照射
70%—75% 的酒精擦洗
空气消 毒灭菌
培养材料 的接种
（6）外植体灭菌
流水冲洗10—20min 或更长时间
0.1%—0.2%氯化汞 液中浸泡10min左右
在10%的次氯酸钠、 饱和漂白粉浸泡 30min左右
70%—75% 酒精中浸泡 30s
天平、培养基分装器、搅拌器等。
冰箱 电炉
酸度计
纯 天水 平器
培养基分装器
搅拌器
2、灭菌设备
蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、 过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。
蒸汽压力灭菌锅
干热消毒柜
无菌瓶顶过滤装置
（参考图）
喷雾消毒器
（参考图）
3、无菌操作设备
超 净 工 作 台
无菌接种箱
4、细胞培养设备 摇床
5、用沾有70%—75%酒精的纱布擦拭盛培养基的 培养器皿，放进工作台。
6、把解剖刀、剪刀、镊子等器械浸泡在95%的 酒精中，再在火焰上消毒，放在器械架上。
7、在酒精灯火焰附近切割备用的接种材料。
8、打开瓶口，用火焰烧瓶口，转动瓶口使瓶口 各部分都烧到。
9、取下接种器械，在火焰上消毒。
10、把培养材料放入培养瓶，盖上瓶口。
培养架
箱
养
培
照
光
150C 250D HZC-250
箱
养
培
荡
振
温
恒
5、细胞学鉴定设备 光学研究显微
镜、实体显微镜、倒 置显微镜
光 学 显 微 镜
倒置显微镜
三、培养器皿及实验用具
1、玻璃器皿
三角瓶 培养皿 培养瓶
2、金属材质用具
接种针 镊子 解剖刀
无菌条件
1、灭菌方法
物理方法： 物理灭菌干热、湿热、射线处理、