牛奶中酪蛋白和乳糖的分离及鉴定
班级：2011级化学班学号：2011111102 姓名：陈雄志【摘要】牛奶是我们日常生活中常见的具有较高营养价值的乳制品，尤其是在婴儿及青少年时期，每天一定量的牛奶能促进身体健康成长，其主要营养成分为酪蛋白和乳糖，本实验将从新鲜牛奶中分离出酪蛋白和乳糖，并分别对其进行鉴定。

【关键词】牛奶酪蛋白乳糖分离鉴定
一、实验目的
1.熟悉查阅文献，从而提取新的设计方案
2.了解分离纯化生物大分子物质的一些方法和手段
3。

掌握鉴定酪蛋白和乳糖的实验方法
二、实验原理
1.酪蛋白是牛奶中的主要蛋白质，是含磷蛋白质的复杂混合物。

蛋白质是两性化合物，当调节牛奶的pH达到酪蛋白的等电点(pH=4．8)时，蛋白质所带正、负电荷相等，呈电中性，此时酪蛋白的溶解度最小，会从牛奶中沉淀出来，以此分离酪蛋白。

因酪蛋白不溶于乙醇和乙醚，可用此两种溶剂除去酪蛋白中的脂肪。

而乳糖不溶于乙醇，当乙醇混入乳糖水溶液中，乳糖会结晶出来，从而达到分离的目的。

2.酪蛋白的鉴定：在小试管中加入10滴酪蛋白溶液，然后加4滴茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现，则为酪蛋白。

乳糖的鉴定：乳糖是还原性糖，绝大部分以α-乳糖和β-乳糖两种同分异构体型态存在，α-乳糖的比旋光度为+86º，而β-乳糖的比旋光度为+35º,水溶液中两种乳糖可互相转变，因此其水溶液有变旋光现象。

三、仪器与试剂
仪器：恒温水浴槽、100mL量筒、真空泵、布氏漏斗、250mL烧杯、玻璃棒、胶头滴管、精密pH计、旋光仪、电子天平。

试剂：牛奶、10%醋酸溶液、无水乙醇、乙醚、碳酸钙粉末、氢氧化钠溶液、氨水、茚三酮试剂。

四、实验步骤
1.酪蛋白的分离：取100mL新鲜牛奶，在恒温水浴中加热至40℃，恒温5分钟左右，边搅拌边慢慢加入10％醋酸溶液，使牛奶pH=4．8，放置冷却、澄清后，用尼龙布过滤酪蛋
白。

(在滤液中加入少量粉状碳酸钙，留作乳糖的分离。

)依次用乙醇、乙醇和乙醚的等体积混合液、乙醚洗涤酪蛋白，去除脂肪，待酪蛋白充分抽滤至微干，称得其质量6.4g。

2.酪蛋白的鉴定：取分离得到的固体少量溶于氢氧化钠溶液制备酪蛋白溶液，在小试管中加入10滴酪蛋白溶液，然后加4滴茚三酮试剂，加热至沸，溶液由无色变为蓝紫色，则有理由推断，分离得到的固体即为酪蛋白。

3.乳糖的分离：将上述实验中所得的上清液(即乳清)置于蒸发皿中，用小火浓缩至15mL左右，在热溶液中加入约50mL 95％乙醇，再加热，使其混合均匀，趁热过滤，滤液应澄清。

滤液移至锥形瓶中，加塞，放置1～2天，让乳糖充分结晶，过滤分离出乳糖晶体用冷的95％乙醇洗涤结晶，得到较为纯净的乳糖晶体，乳糖的湿重为1.47g。

4.乳糖的鉴定：准确称取1.47g得到的乳糖，待旋光仪预热后，快速配成29.5ml水溶液，加入2滴浓氨水，摇匀，静置20min后用旋光仪测其旋光度是+1.45º。

五、注意事项
1.酪蛋白等电点随温度不同而变化,等电点pH为4.6～4.8。

分离酪蛋白时,边加醋酸,边搅拌,边测pH,同时观察沉淀。

开始快搅拌,接近等电点时,应慢搅拌。

2.用乙醇和乙醚清洗酪蛋白沉淀时,应将酪蛋白捣碎,并在溶剂中搅拌、浸泡,充分洗净脂肪。

纯净的酪蛋白应为白色,若发黄表明脂肪未洗干净。

3.测定乳糖的平衡旋光度时,因其有变旋光现象，应加入2滴浓氨水,待平衡后再测。

六．实验结果
1.pH调至4.8以后，在过滤是一定要先用纱布或者尼龙布过滤，若直接选择抽滤，则会导致大大加长实验时间。

2.所值得的乳糖含量太少，可能是在用结晶过程中，结晶不够完全。

参考文献：
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[4].张鲁雁.张剑霞.丁声颂.推荐一个与生命科学有关的综合化学实验——牛奶中酪蛋白和乳糖的分离与鉴定[期刊论文]-大学化学2006,21(2)。